免疫遺伝子超可変部をマ-カとした2ステップPCR法による微量残存腫瘍の検出

以免疫基因高变区为标志物的两步PCR法检测痕量残留肿瘤

• 批准号: 03152056
• 负责人: 大野 竜三
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152056/
• 关键词: 急性リンパ性白血病; cALL; 免疫グロブリン遺伝子; 微量残存腫瘍; CDR3; 分子マ-カ-

プレB細胞型急性リンパ型白血病(cALL)を対象として、以下の研究を行った。1)20例のcALL細胞よりDNAを調整し、VH遺伝子に共通な配列とJHに共通な配列をプライマ-として用い、PCRにて免疫グロブリン超可変部(CDR3)のDNAを増幅した。それをM13ベクタ-に組み込み、配列を決定した。その結果、各々の症例におけるCDR3の多様性が確認された。また、DHやJH遺伝子の使用頻度の偏りや極めて少ない点突然変異は、B細胞成熟過程における免疫グロブリン遺伝子構成を反映したものと考えられた。2)各々のCDR3DNA配列をプロ-ブとしたサザンブロットの、残存腫瘍検出感度ならびに特異性について検討した。正常細胞に対して10^<ー5>の混入が検出可能であり、このレベルでは、CDR3の配列は完全に腫瘍特異的であった。3)cALL4症例における、臨床経過と残存腫瘍の推移について検討した。患者骨髄細胞は正常細胞と段階的割合で混合され、残存腫瘍の判定量が行われた。その結果、寛解導入療法後は10^<ー2>から10^<ー3>レベルの腫瘍が残るが、地固め療法中にさらに減少し、1例では検出感度以下となった。また、骨髄移植直後認められた微量残存腫瘍が移植後3ヶ月目に消失した症例も認められた。以上より、CDR3を分子マ-カ-とした残存白血病の検出は、充分に実用的であると考えられる。今後、このような分子生物学的寛解の判定法を、地固め強化療法、免疫法、GVLなど、従来の形態学的診断では不可能であった分野での新しい評価法として、確立してゆきたい。

B-cell acute leukemia (cALL) is the most common type of leukemia. 1)20 For example, the DNA of cALL cells is regulated, VH gene is common, JH gene is common, PCR gene is immune, CDR3 DNA is amplified. M13: The best way to make a decision The diversity of CDR3 was confirmed by the results and symptoms. The frequency of use of DH and JH genes varies greatly, and the composition of immune cells during B cell maturation is reflected in the study. 2)Each CDR3 DNA sequence is detected by sensitivity and specificity. Normal cell pairs may be mixed, but the CDR3 alignment is completely tumor-specific 3) 4 cases of cALL were diagnosed by clinical course and residual tumor progression. The patient's bone marrow cells were mixed with normal cells and the residual tumor was determined. The results showed that after the treatment, the tumor was reduced by 10^<2>, 10^<3>, 1 case was reduced by 10 ^<2>, 1 case was reduced by 10 ^<3>, and 1 case was reduced by 10 ^<2>. The residual tumor disappeared 3 months after transplantation. The above CDR3 molecules are used to detect residual leukemia. In the future, the molecular biological interpretation of the determination method, ground consolidation, intensive therapy, immunology, GVL, morphology of the diagnosis is impossible to distinguish between the new evaluation method, established

项目成果

Ryuzo Ohno,et al.: "Intensive individualized induction therapy with behenoyl cytarabine,daunorubicin and 6-mercaptopurine followed by intensive consolidation including intermediate-dose continuous cytarabine,mitoxantron,etoposide and vinca alkaloids in ac

Ryuzo Ohno 等人：“使用山嵛酰阿糖胞苷、柔红霉素和 6-巯基嘌呤进行强化个体化诱导治疗，然后进行强化巩固治疗，包括中剂量连续阿糖胞苷、米托蒽醌、依托泊苷和长春花生物碱。

Kohji Ezaki,et al.: "A combination trial of human lymphoblastoid interferon and bestrabucil (KM2210) for adult T-cell leukemia-lymphoma." Cancer. 68. 695-698 (1991)

Kohji Ezaki 等人：“人淋巴母细胞干扰素和 besttrabucil (KM2210) 治疗成人 T 细胞白血病-淋巴瘤的联合试验。”

Hitoshi Kiyoi,et al.: "Characterization of the immunoglobulin heavy chain complementarity determining region (CDR)-III sequences from human B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia cells." J Clin Inv.

Hitoshi Kiyoi 等人：“人 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病细胞的免疫球蛋白重链互补决定区 (CDR)-III 序列的表征。”

Hitoshi Kiyoi,et al.: "Disappearance of minimal residual lymphoblastic leukemia cells 6 months after allogeneic bone marrow transplantation without GVHD." Bone Marrow Transplantation. 8. 59-62 (1991)

Hitoshi Kiyoi 等人：“无 GVHD 的同种异体骨髓移植后 6 个月，微小残留淋巴细胞白血病细胞消失。”

Ryuzo Ohno,et al.: "Treatment of myelodysplastic syndomes with orally administered 1ーβーDーarabinofuranosylcytosineー5'ーstearylphosphate." Oncology. 48. 451-453 (1991)

Ryuzo Ohno 等人：“口服 1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶-5-硬脂基磷酸盐治疗骨髓增生异常综合征”，《肿瘤学》48. 451-453 (1991)。