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ジャンボタニシのグリコシダ-ゼの分離・精整とその性質

大蜗牛糖苷酶的分离精制及其性质

基本信息

批准号：
03660092
负责人：
船津軍喜
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.各種グリコシダ-ゼの分離・精製タニシ内臓からの抽出はIM食塩含有酢酸緩衝液(pH4)で行い、粗酵素は硫安1/2飽和沈殿を酢酸緩衝液(pH4)に溶解後、4M食塩を加えた可溶性画分として得た。粗酵素をまずブチルトヨパ-ル疎水クロマトにより3つの画分に分画し、画分1からβーキシロシダ-ゼ(Xase)、βーマンノシダ-ゼ(Mase)及びβーNーアセチルグルコサミニダ-ゼ(NAGase)を、画分3からαーフコシダ-ゼ(Fase)を分離した。それぞれの酵素を含む画分をセファクリルSー300ゲル濾過及びQーセファロ-スカラムクロマトで分離し、さらにmono QーFPLCにより精製した。また、混入するNAGaseの除去には65℃、3分間の処理が効果的であることがわかった.2.各種グリコシダ-ゼの性質及び作用精製したXase,Fase及びNAGaseの分子量は、SDSーPAGEでそれぞれ81,54、150及び55KDa、Superoseゲル濾過でそれぞれ140、300、440及び340KDaと測定され、それぞれ2、6、3及び6量体を形成することがわかった。それらの作用至適pHはそれぞれPH3〜6、pH3.5、pH5及びpH3ー6であり、pH3〜7ではいずれも安定で、3分間熱した場合、それぞれ60℃,70℃,48℃及び48℃までは殆んど活性の低下はみられなかった。金属イオンは活性に影響なかったが、PCMBによりFase,Mase及びNAGーaseの活性は低下した。Xase及びFaseの複合型オリゴ糖MX,MFX及びM3FXに対する作用を調べた結果、それぞれキシロ-ス及びフコ-スのみを特異的に水解し、他のグリコシド結合は水解しなかった。また、Xaseは(NAG)_2M3FX及び(NAG)_2M3Xのキシロ-スには作用しなかった。以上の結果、ジャンボタニシからのXase及びFaseは複合型糖鎖の構造研究に有効であることがわかった。

1. Separation and purification of various sterilized chlorine-containing ingredients, extracted and extracted IM foods containing anhydrous acid buffer (pH 4), The crude enzyme was dissolved in 1/2 saturated thiol anhydride buffer (pH 4), and then soluble in 4M sodium chloride and separated. Crude enzyme をまずブチルトヨパ-ル疎水クロマトにより3つの画分に分Drawing, drawing points 1からβーキシロシダ-ゼ(Xase), βーマンノシダ-ゼ(Mase) and びβーNーアセチルグルコサミニダ-(NAGase)を, draw points 3からαーフコシダ-ゼ(Fase)をseparationした.それぞれのENzyme contains むdrawing points をセファクリルSー300ゲルfiltered And びQーセファロ-スカラムクロマトでseparationし、さらにmono QーFPLC is refined.また, mixed with するNAGase to remove the effect of には65℃, 3 minutes of treatment, であることがわかった.2. Eachグリコシダ-ゼのProperties and functionsRefined したXase, Fase and びNAGaseのMolecular weightは, SDSーP AGEでそれぞれ81,54,150 and び55KDa, Superoseゲルfiltered でそれぞれ140,3 00, 440 and び340KDa are measured and され, それぞれ2, 6, 3 and び6 are measured and formed into することがわかった.それらの acts to the appropriate pH はそれぞれPH3~6, pH3.5, pH5 and びpH3ー6であり, pH3~7 ではいずれもStable, 3-minute heat treatment, 60°C, 70°C, 48°C and 48°C can be used to reduce activity. The activity of metal fluorocarbons affects the activity of なかったが, PCMB によりFase, Mase and びNAG ーase, and the activity is reduced. Xase and びFase's compound オリゴsugar MX, MFX and びM3FX's action and adjustment results,それぞれキシロ-ス and びフコ-スのみをspecific にhydrolyzed し, and other のグリコシド combined はhydrolyzed しなかった.また, The above results, research on the structure of the complex sugar locks of the Xase and Fase complex sugar locks, are effective.