非アイソト-プ標識in situ分子雑種法による遺伝子マッピング法の開発

使用非同位素标记原位分子杂交方法开发基因作图方法

• 批准号: 03554025
• 负责人: 吉田 廸弘
• 金额: $ 6.27万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03554025/
• 关键词: PCR; FISH; 遺伝子マッピング

遺伝子マッピングのための非アイソト-プ(蛍光)標識in situハイブリダイゼ-ション(FISH)法を確立するうえで、標的となる染色体DNAの増幅法の開発を目指した。通常のDNA増幅(PCR)器を染色体標本スライド用に改良し、スライド上の染色体DNAをそのままPCRができるようなプレ-トを考案した。このPCR器を用い次の結果が得られた。(1)ヒト動原体部位のアルファサテライトDNA配列より設定した23-mersのプライマ-(Grayら、1991)をPCR法により増幅し、プロ-ブとした。このPCRプロ-ブを染色体標本スライド上に滴下し、ビオチン存在下で、PCR法により染色体DNAの増幅と標識を同時に行なうin situ hybridizationを行なった。その結果、染色体動原体部位ならびに静止核にアルファサテライトDNA配列のシグナルがみられ、スライド上のPCR法は成功した。(2)シングルコピ-遺伝子については遺伝子が挿入されたプラスミドとスライド標本をそれぞれPCRにより増幅したものに、ビオチン標識PCRプロ-ブをハイブリダイズする2重増幅により行なった。用いた遺伝子にもよるが、シグナルが検出されたものもあるので、このスライドPCR法は遺伝子の染色体上の部位を検出する上で、有効な手段とし利用できるものと思われる。したがって、今回開発したPCR器は染色体マッピングに十分威力を発揮することが分かった。現在、遺伝子マッピング以外に組織や器官などにおけるmRNAの検出など組織像のin situハイブリダイゼ-ションに応用すべく検討を行なっているところである。

In this case, you need to know that the in situ (optical) flag makes sure that you do not register your information by using the FISH method, and that you can use the method of DNA amplitude of your chromosomes to determine your target. Usually the "DNA" frame (PCR) device "chromosome header" uses "improved", "chromosome DNA", "chromosome PCR", "chromosome", "PCR", "chromosome", "chromosome" and "chromosome". After using the results of the second test of the PCR device, you can get a good result. (1) to set the configuration of the DNA for the location of the mycoplasma, the Gray, 1991, the PCR method, the frame, the size, the length, the size, the size, the In this document, there is a drop on the top of the PCR tag, and there is a drop on the chromosome. The PCR method is used to check the DNA amplitude of the chromosome. At the same time, the registration in situ hybridization is registered. The results showed that the results of the chromosome kinetogen site, the rest of the nucleus, the rest of the nucleus, the DNA configuration, the success of the PCR method, and the success of the PCR method. (2) in the middle of the day, you will need to know that you are not aware of the PCR. (2) in this section, you will need to know that you are not aware of the PCR. Use the PCR method to find out the location on the chromosome of the child, and use the means to make use of it. This time, it is very powerful to open the PCR chromosome monitoring system. Now, you need to make sure that your organs are in good condition, and that mRNA is responsible for making sure that your organization is like in situ.

项目成果

村松 正実(編): "医科分子生物学" 南江堂, 479 (1991)

村松正美（主编）：《医学分子生物学》 Nankodo，479（1991）

Kato,S.,Tachibana,K.,Takayama,N,Kataoka,H.,Yoshida,M.C.& Takano,T.: "Genetic recombination in a chromosomal translocation t(2;8)(pll;q24)of a Burkitt′s lymphoma cell line, KOBK101." Gene. 97. 239-244 (1991)

Kato, S.、Tachibana, K.、Takayama, N、Kataoka, H.、Yoshida, M.C. 和 Takano, T.：“Burkitt 染色体易位 t(2;8)(pll;q24) 中的基因重组s 淋巴瘤细胞系，KOBK101。”Gene. 97. 239-244 (1991)

Ozawa,K,Sudo,T.Soeda,E.,Yoshida,MC,&Ishii,S.: "Assignment of the human CREB2(CRE BP1)gene to 2q32" Genomics. 10. 1103-1104 (1991)

小泽,K,须藤,T.添田,E.,吉田,MC,

Matsuoka,R.,Yoshida,MC,Kanda,N.,Furutani,Y.,Bruns,G.Yanagisawa,M.&Takao,A.: "Human smooth muscle myosin heavy-chain gene mapped to chromosomal region 16q12.1-q12.2." Cytogenet.Cell Genet.58. 2000-2001 (1991)

松冈，R.，吉田，MC，神田，N.，古谷，Y.，Bruns，G.柳泽，M.

Yoshida,M.C.,Nishizawa,M.,Kataoka,K.,Goto,N.,Fujiwara,K.T.,&Kawai,S.: "Localization of the human MAF protooncogene on chromosome 16 to bands q22-q23." Cytogenet.Cell Genet.58. 2003- (1991)

吉田，M.C.，西泽，M.，片冈，K.，后藤，N.，藤原，K.T.，