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ストレス蛋白質によるがん遺伝子産物機能発現の保証機構

通过应激蛋白确保癌症基因产物功能表达的机制

基本信息

批准号：
05152154
负责人：
矢原一郎
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)SV40ラージT抗原とHSP90の相互作用:SV40でトランスフォームしたCOS細胞とその親株であるCV1細胞の粗抽出液より、SV40ラージT抗原(LT)とHSP90をそれぞれの特異抗体を用いて免疫沈殿した。免疫複合体に含まれる蛋白質をSDS-PAGEで分離し、ウェスタンブロッドで解析した。その結果、COS細胞でHSP90を免疫沈殿するとLTが、またLTを免疫沈殿するとHSP90が共沈殿することが明らかになった。この共沈殿はLTを発現している他の細胞株(例えばW126-VA4)の抽出液でも認められたが、CV1細胞の抽出液では認められなかった。次に、HSP90とLTをそれぞれ精製し、in vitroで複合体の再構成を試みた(われわれはHSP90とカゼインキナーゼIIの複合体の再構成に成功している)。精製したLTモノマーは温度、ATP依存的に2量体、3量体を経て6量体を形成した。この系にHSP90を添加すると、LTの6量体形成を促進することを見いだした。HSP90の2量体形成に必要なドメインHSP90の大部分は2量体を形成している。精製したマウスHSP90をmカルパインで部分分解したところ、モノマーに分離した。カルパイン処理産物のそれぞれのバンドのN末端からのアミノ酸配列を決定したところ、どれも元の完全長のHSP90分子と同じ配列であった。この結果は、mカルパインはHSP90のC末端側を切断したことを示唆している。次ぎに、ヒトHSP90alphacDNAをin vitroで転写、翻訳すると2量体になることをnative PAGEで確認した。そこで、C末端より49個のアミノ酸が欠落するように改変したHSP90alphaを同様にin vitroで発現したところ、2量体を形成しなかった。一方、N末端より118個のアミノ酸を欠落したHSP90alphaは完全長のHSP90alphaと同様に2量体を形成した。これらの結果は、HSP90alphaの2量体形成にはそのC末端の部位が必要であることを示唆している。

1) SV40 T antigen and HSP90 interaction: SV40 T antigen and HSP90 specific antibodies were used in the immune system. The immune complexes were separated by SDS-PAGE and analyzed. HSP90 is the most common type of immune response in COS cells. The co-culture medium was found in the extract of other cell lines (e.g., W126-VA4) and CV1 cells. HSP90 and LT were refined and reconstructed successfully in vitro. Refinement depends on temperature and ATP. 2 - 3- This is the first time that HSP90 has been added and LT 6 has been promoted. The formation of HSP90 is necessary for most of HSP90 to form. HSP90 is a very important component of the system. The N-terminal amino acid sequence of the product is determined by the amino acid sequence of HSP90. The result is that the C-terminal side of HSP90 is cut off. HSP90 alpha DNA was identified in vitro by native PAGE. 49 of the 49 amino acids in the C-terminal were found in vitro. One side, N terminal, 118 amino acids, HSP90alpha, complete length, HSP90alpha, 2 amino acids As a result, HSP90 alpha and C-terminal sites are essential for the formation of these molecules.