糸状菌フサリュウムのメタロチオネイン遺伝子の分離、解析とその応用

丝状真菌镰刀菌金属硫蛋白基因的分离、分析及应用

• 批准号: 05760075
• 负责人: 秋山 浩一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760075/
• 关键词: メタロチオネイン; クローニング; フサリウム・オキシスポラム

農作物の病虫害に対する生物学的防除法の開発は、現代農業における大きな課題である。この問題の解決に近づくために、遺伝子操作技術を用いて土壌微生物に有用遺伝子を導入しこれを利用することを計画した。有用遺伝子の担い手としては、土壌中で繁殖力が強く、かつ遺伝子操作可能な非病原性の糸状菌フサリュウム・オキシスポラムを選んだ。また、発現量が多く、それを調節することができる遺伝子システムとして、銅の存在によって誘導され銅と結合するタンパク質、メタロチオネインを選んだ。研究の第一段階として、フサリュウム・オキシスポラムのメタロチオネイン遺伝子をクローニングすることを試みた。そのために先ず、すでにクローニングされ塩基配列が決定されている糸状菌ノイロスポラ・クラッサのメタロチオネイン遺伝子を参考にして、23merのオリゴヌクレオチドプローブを作製した。このプローブを用いて、フサリュウム・オキシスポラムのゲノムDNAとサザンハイブリダイゼーションを行なった。その結果、合成したプローブは約3.5kbpのEcoRI断片とハイブリダイズすることが明らかとなった。そこで、約3.5kbpのEcoRI断片をプラスミドベクター(pUC18)に組み込んだ後、大腸菌(JM109)を形質転換させることによってDNAライブラリーを作製した。現在、このライブラリーからコロニーハイブリダイゼーションによりメタロチオネイン遺伝子断片を含んだプラスミドを持つ大腸菌のスクリーニングを行なっている。

The development of biological control methods for crop diseases and insect pests is a major issue in modern agriculture. The solution of this problem is to introduce useful genes into the soil and to use them. The selection of nonpathogenic bacteria is possible due to the high fertility of the bacteria in the soil and the high fertility of the bacteria in the soil The presence of copper induces the binding of copper to the environment. The first stage of the study is to try to find out the best way to improve the quality of the products. All the information in the database is available for reference, and the 23-mer database is available for selection. This is the first time I've ever seen a woman's face. As a result, the EcoRI fragment of about 3.5 kbp was synthesized. The EcoRI fragment of about 3.5kbp was cloned into pUC18 and then transformed into E. coli (JM109). Now, in this case, it is necessary to carry out the investigation of intestinal bacteria in order to prevent the occurrence of intestinal diseases.