神経特異的Naチャネル遺伝子の転写・翻訳過程の生理・分子生物学的解析

神经特异性Na通道基因转录和翻译过程的生理和分子生物学分析

• 批准号: 05770024
• 负责人: 岡村 康司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770024/
• 关键词: Naチャネル; TuNaI遺伝子; アンチセンスDNA; 神経細胞特異的; Whole-Mountホヤ胚; in situ hybridization; ホヤ分裂抑止割球; 誘導性転写

(1)定量的RT-PCR法により、単純な神経誘導の系であるホヤ分割抑止多核神経割球に、昨年度クローニングしたラット脳のNaチャネルと相同性の高いクローンTuNaIのmRNAが発現誘導されることが確認された。(2)TuNaIの翻訳開始部位に特異的なアンチセンスDNAを、分化型のNaチャネルを機能発現していない初期の多核神経前駆細胞へ微小注入し、以降のNaチャネル電流の発現への影響を調べた。アンチセンスDNAを注入した群では、K電流の発現には影響を与えなかったがNaチャネル電流の発現はコントロールDNAを注入した群に比べて有意に減少し、TuNaIが神経特異的に発現するNaチャネルに対応することが明らかになった。(3)ジゴキシゲニンRNAプローブを用いたin situ hybridization法によりTuNaIのmRNAは尾部から頭部の広い神経系に発現していた。また、その発現パターンはホヤ神経系のニューロンの分布領域に対応し、TuNaIの発現がニューロン特異的であることが示唆された。(4)単離した外胚葉割球を誘導能をもつ植物側割球と一対一で細胞接着させ分割を停めた状態で培養するとTuNaIの転写が誘導された。誘導能を持たない割球と接着させた場合や、単独で培養した場合には誘導は起こらなかった。また、8細胞期に誘導割球を除去し、残った部分胚を培養すると筋特異的な遺伝子産物であるミオシンの発現は影響されないがTuNaIの発現は検出されなくなった。従ってTuNaIの転写発現に植物側割球からのシグナルが必須であると結論された。以上、TuNaIは従来電気生理学的解析で観察してきたホヤ神経特異的Naチャネルをコードし、その発現は細胞間の相互作用により転写レベルで誘導調節されることが明らかになった。これらの知見は、今後この遺伝子の5'上流発現制御域を解析する上での基礎となる。

(1)Quantitative RT-PCR method for the detection of pure and unpurified mRNA induced by DNA fragmentation and inhibition of polynuclear DNA fragmentation was used to confirm the high identity of TuI mRNA. (2) The effect of microinjection on the development of DNA, differentiated DNA and differentiated DNA in the initial stage of TUI on the development of DNA, differentiated DNA and differentiated DNA in the initial stage of TUI was modulated. The effect of DNA injection on the occurrence of K current is significantly lower than that of DNA injection on the occurrence of K current. (3)The expression of TuNaI mRNA in the tail and in the nervous system was detected by situ hybridization. The development of the brain system is related to the distribution of the brain system, and the development of the brain system is related to the distribution of the brain system. (4)In addition, it can be induced by cell culture in vitro. Inductive energy can be induced in the following situations: In addition, 8-cell stage induction and partial embryo culture were used to study the effects of different gene products on the development of TuNaI. It is necessary to draw conclusions from the study of plant development. The above, TuNaI to the analysis of electrical physiology, to investigate the occurrence of neuro-specific Na + The 5'upstream development domain of the knowledge base and the future development base are analyzed.

项目成果

Okamura,Y.: "Primary structure and neuronal gene expression of an ascidian sodium channel" Japanese Journal of Physiology. 43. S165- (1993)

Okamura,Y.：“海鞘钠通道的初级结构和神经元基因表达”日本生理学杂志。

Okamura,Y.: "Neural induction suppresses early expression of the inward-rectifier K^+channel in the ascidian blastomere" Journal of Physiology. 463. 245-268 (1993)

Okamura,Y.：“神经诱导抑制海鞘卵裂球中内向整流 K^ 通道的早期表达”生理学杂志。

Okamura,Y.: "The ascidian embryo as a prototype of vertebrate neurogenesis" Bio Essays. 15. 723-730 (1993)

Okamura,Y.：“海鞘胚胎作为脊椎动物神经发生的原型”生物论文。

Ono,F.: "Neuron-specific gene expression of Na^+ channel in a single neurally-induced blastomere from an ascidian embryo" Neuroscience Research. suppl.18. S126- (1993)

Ono，F.：“来自海鞘胚胎的单个神经诱导的卵裂球中Na + 通道的神经元特异性基因表达”神经科学研究。