トランスジェニックマウスによるC型肝炎ウィルス複製系および病態モデル系の確立

转基因小鼠丙型肝炎病毒复制体系及病理模型体系的建立

• 批准号: 05770162
• 负责人: 加藤 珠実
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770162/
• 关键词: トランスジェニックマウス; C型肝炎ウイルス; アルブミンプロモーター

Palmiter博士より供与されたエクスプレッションベクターpAlb-hGHを導入遺伝子の作製に使用した。このpAlb-hGHは、マウスアルブミンのエンハンサー(-12〜-8.5kb)およびプロモーター(-0.3〜0kb)の制御下に、レポータージーンとしてヒト成長ホルモン遺伝子を組み込んだPUC系プラスミドであり、マウスにおいて導入遺伝子として使用した場合、レポータージーンの肝特異的発現が十分に期待でき得るものである。まず、pAlb-hGHのhGH翻訳領域をpolyA付加シグナルを残した形で取り除き、この部分に新たに我々の研究室でクローニングした5^'側、3^'側の非翻訳領域を含む日本株HCV-Nの全長遺伝子を組み込み、PUCベクター部分を取り除いて導入遺伝子を作製した。この導入遺伝子を、C57BL/6の受精卵に一個につき、約1000コピーずつ注入した後、一晩培養し、2細胞期に入ったもののみ選別してICR系偽妊娠マウスに卵管移植し、自然分娩或は帝王切開によって現在までに59頭の産仔を得ている。このうち、既に離乳している20頭のTailDNAについて導入遺伝子の有無をPCR法によって調べたが、導入遺伝子の存在は確認されなかった。現在も、約50個の受精卵に週2回のマイクロインジェクションを施行中である。一方、このように作製したトランスジェニックマウスでは、胎児期からのHCV抗原産生により、HCV抗原に対し免疫寛容となっていることが予測されるので、HCV抗原で感作した同系正常マウス免疫系の移入による肝炎病態モデルの作製を考えている。その予備実験としてマウスの各系統間(C57BL/6J,C3H/He,BALB/c)におけるHCVのコア蛋白に対する抗体産生能をELISA法により調べてみた。その結果、今回トランスジェニックマウス作製に使用したC57BL/6において最も高い抗体産生能が観察され、肝炎病態モデル作製に十分な免疫応答があるものと予測された。

Dr. Palmiter is responsible for the production and use of Alb-hGH, which was introduced by Dr. Palmiter.このpAlb-hGHは、マウスアルブミンのエンハンサー(-12～-8.5kb)およびプロモーター(-0.3~0kb)のcontrol下に、レポータージーンとしてヒトGrowthホルモン缝子を组み込んだPUC system プラスミドであり, マウスにおいて imported 缝子とWhen you use it, you can expect liver-specific liver disease to appear very much.まず, pAlb-hGH のhGH translation field をpolyA plus シグナルをThe remaining shape is taken out and removed, and the part is new and new. The non-translated areas of the 5^' side and 3^' side contain the full length of the Japanese strain HCV-N, the full length of the left 伝子を group, and the PUC ベクター part of the を take and remove the いて imported and produced by the remaining 伝子を. After injecting the remaining fertilized egg of C57BL/6 into one fertilized egg, about 1000 コピーずつ was injected into the sterilizer, and it was cultured overnight, and the 2-cell stage was sterilized. The ICR is a pseudo-pregnancy tube transplantation, natural delivery or an imperial incision, and the baby is now born with 59 piglets.このうち、 　　　　　　　　　２　　　　　　　　　　　　　　　　ifies 20号。 Whether or not the PCR method is used to adjust the test, and the existence of the imported crocodile is confirmed. Currently, approximately 50 fertilized eggs are fertilized twice a week and are administered at the same time. One side, したトランスジェニックマウスでは, Taiyan Period HCV antigen production, HCV antigen immunity and immunityっていることが Predict されるので, HCV antigen でsensitivity した Same line normal マウスimmune system の transplantation によるHepatitis morbid モデルの Make をtest えている. Each system of the そのPreparation System (C57BL/6J, C3H/He, BALB/ c) Antibodies produced by HCV protein can be produced by ELISA method. The result of this issue, this time Toroman's production is using the highest quality of C57BL/6においていAntibody production can be observed and tested, and hepatitis morbidity can be measured by making a very good immune response.