トランスジェニックマウスによるC型肝炎癌化機構の解析

利用转基因小鼠分析丙型肝炎致癌机制

• 批准号: 07770169
• 负责人: 加藤 珠実
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770169/
• 关键词: トランスジェニックマウス; C型肝炎ウイルス; メチル化DNA; 5-アザシチジン

クローニングした日本株HCV-Nの非翻訳領域を含む全長遺伝子約9.4kb、或いは構造蛋白であるコア、エンベロープを含む部分遺伝子3.8kbをアルブミン、またはSR_αプロモーターの制御下に組み込んで導入遺伝子を作製し、マウス受精卵に注入してHCV遺伝子を導入したトランスジェニックマウスの作製を試みた。その結果、全長遺伝子については、アルブミンプロモーター制御下で19ライン、SR_αプロモーター制御下で9ライン、合計28ラインのトランスジェニックマウスを得ることに成功した。一方、3.8kb部分遺伝子については、アルブミンプロモーター制御下に導入した3ラインのマウスが得られたが、肝臓、腎臓など、主な臓器における導入遺伝子発現は認められなかった。そこで、各臓器における導入遺伝子のメチル化をメチル化感受性の制限酵素消化により調べたところ、3ラインのマウスのいずれにおいても導入遺伝子が高度にメチル化を受けていることがわかった。これらのマウスに脱メチル化剤である5-azacyti dineを投与するとHCV遺伝子の発現が観察されることから、トランスジェニックマウスでHCV遺伝子が発現しない理由として直接メチル化が関与していることが明かとなった。全長遺伝子導入マウスについては、外来遺伝子導入の際一般に導入コピー数の多いものはメチル化による不活性化を受け易いことから少ないラインよりF1を作製し、9ライン15匹の解析を行なったが、導入遺伝子の発現は確認されなかった。メチル化解析の結果、これらのマウスにおいても導入遺伝子が高度にメチル化されていることが明かとなった。DNAのメチル化は、遺伝子発現制御機構の一つであり、genomic imprintingや、外来遺伝子の発現抑制にも深く関与しており、もともとHCV遺伝子には、メチル化のターゲットとなるCpG配列が数多く含まれることから、in vivo. in vitroにおけるHCVの遺伝子発現には、この配列の存在を考慮する必要があるのかもしれない。現在、脱メチル化剤によるこれらのマウスでの導入遺伝子発現を試みると同時に、残りのラインについても導入遺伝子の発現の有無を調べている。今後は、脱メチル化剤誘導によるものも含む導入遺伝子の発現が観察されたマウスについて、HCV抗原、或いはウイルス産生の有無を調べ、C型肝炎の動物モデル系としての可能性を検討する予定である。

クローニングしたJapanese strain HCV-N's non-translated field contains the full length of the remaining parts about 9.4kb, Or いはstructural protein であるコア, エンベロープをcontains part of the legacy 伝子 3.8kb をアルブミン, またはSR_αプロモーターのcontrolled under the control group み込んで imported legacy 伝子をproduced し, マウスReceive The sperm and eggs are injected into the HCV test.そのRESULTS, full-length remaining 伝子については, アルブミンプロモーターcontrol下で19ライン, SR_αプロモーターcontrolled the next で9ライン, and the total was 28ラインのトランスジェニックマウスを got the success of the ることにした. One party, 3.8kb part of the legacy of the については, アルブミンプロモーターcontrolled import した3ラインのマウスが得られたが, liver 臓, kidney 蓓など, main な蓓器 における introduced the remaining 伝子発 appear められなかった.そこで, each geni device における introduction of the remaining のメチル化をメチルchemical sensitivity のlimited enzyme digestion により Adjustment べたところ, 3ラインのマウスのいずれにおいても introductory 伝子が高にメチル化をReceived けていることがわかった. azacyti dineをinvestment and HCV legacy 伝子の発 appear が観看されることから、トランスジェニクマウスでHCV legacy 伝子が発appears しないreason として メチル化が关与していることが明かとなった. The full-length legacy of the legacy is imported into the マウスについては. Made by いことから小ないラインよりF1を, 9ライン15 piecesのanalytic を行なったが, import the remaining 伝子の発appear はconfirmation されなかった. The result of メチル化analytical, これらのマウスにおいても imported 缝子が高にメチル化されていることが明かとなった. DNA のメチル化は, 缝子発出款 control organization の一つであり, genomic Imprintingや、The foreign legacy 伝子の発appears to inhibit にも深く关与しており、もともとHC V 伝子には、メチル化のターゲットとなるCpG arrangementがnumber多くcontainingまれることから、in vivo. It is necessary to consider the existence of HCV in vitro and the presence of HCV in vivo. Now, take off the メチル化によるこれらのマウスでの Import the remaining 伝子発 appear をtrial みるとAt the same time, に, residual りのラインについても are introduced into the remaining 伝子の発见の有无を动べている. From now on, we will introduce the anaphylactoid-induced sterilization and HCV anti- The original, or the possibility of the occurrence of hepatitis C and the possibility of hepatitis C are determined.