イヌにおけるインターロイキン-8遺伝子のクローニングと解析

犬白细胞介素8基因的克隆与分析

• 批准号: 05770167
• 负责人: 石川 淳
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770167/
• 关键词: インターロイキン; インターロイキン-8; サイトカイン; イヌ; 分子生物学; 免疫学

本研究では、ヒトIL-8遺伝子から設計したプライマーを用いてPCRを行い、イヌの培養細胞および血球細胞から増幅した2.3-kbの断片がイヌIL-8遺伝子である可能性を検討した。1.イヌ培養細胞(ATCC CCL 34 MDCK)あるいは血球細胞(ビ-グル犬)から抽出した染色体DNAを鋳型とし、ヒトIL-8遺伝子から設計したプライマーを用いてPCRを行った。2.増幅された2.3-kb断片をpUC118に連結し、E.coliK-12にクローニングした。3.クローン化断片の塩基配列をジデオキシ法により決定した。4.ヒトIL-8遺伝子との比較により、遺伝子構造(エクソン、イントロン)を推定した。5.推定した遺伝子構造に基づき、塩基配列をアミノ酸配列に翻訳し、ヒトIL-8とのホモロジーを調べた。その結果、クローン化断片はヒトIL-8タンパクに75%の相同性をもつ、101アミノ酸からなるタンパクをコード可能なことがわかった。遺伝子構造は第4エクソンに2アミノ酸の違いがあるの他はまったく同じであった。6.イヌ末梢血から分離した多形核白血球をLPSにより刺激した。7.RNAを抽出し、クローン化断片をプローブとしてノーザンブロッティングを行った。その結果、約1.5-kbのmRNAが検出され、LPSで刺激したサンプルでは無刺激の6倍の発現が観察された。以上の結果から、イヌにおけるIL-8遺伝子の存在がはじめて明らかになった。

In this study, we investigated the possibility of using PCR to amplify IL-8 gene fragments in cultured cells and blood cells. 1. Culture cells (ATCC CCL 34 MDCK) were used to extract chromosomal DNA and IL-8 gene. 2. Amplitude of 2.3 kb fragment pUC118 link, E. coli K-12 link 3. The basic arrangement of the fragment is determined by the method. 4. Comparison of IL-8 gene and gene structure. 5. It is estimated that the molecular structure of IL-8 is different from that of IL-8. The results showed that IL-8 was 75% identical to IL-8, and IL-8 was 75% identical to IL-8. The structure of the fourth generation is the same as that of the second generation. 6. The peripheral blood was separated from the polymorphonuclear leukocytes by LPS. 7. RNA extraction and fragmentation As a result, about 1.5-kb mRNA was detected, LPS stimulated the expression of mRNA, and 6-fold unstimulated mRNA was detected. As a result, the IL-8 gene was found to exist.