ウェルシュ菌・theta-毒素遺伝子発現調節機構の分子生物学的解析

产气荚膜梭菌theta毒素基因表达调控机制的分子生物学分析

• 批准号: 05770181
• 负责人: 清水 徹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770181/
• 关键词: ウェルシュ菌; Clostridium pesfringens; 溶血毒素; 遺伝子発現; 二成分制御系

本年度の研究によって得られた成果は以下のとおりであった。1.ウェルシュ菌内でのtheta-毒素遺伝子(pfoA)の発現に成功した。ウェルシュ菌で複製できるプラスミド(pJIR418)へ 毒素遺伝子(pfoA)断片を挿入し、これをウェルシュ菌へ電気穿孔法(electroporation)によって導入し、プラスミド上のpfoA遺伝子の発現を調べた。このプラスミドを形質転換したウェルシュ菌では溶血活性が上昇し、外来のtheta毒素遺伝子が効率よく発現されたと考えられた。2.ウェルシュ菌でpfoR遺伝子以外のtheta-毒素遺伝子発現調節遺伝子がクローニングされた。ウェルシュ菌のさまざまなtheta-毒素産生変異株におけるtheta毒素遺伝子の発現を解析した結果、pfoR遺伝子以外にもtheta-毒素遺伝子の発現を調節している遺伝子が存在することが明らかとなり、この新たな調節遺伝子を直接ウェルシュ菌にてクローニングした。この遺伝子(virR)は、細菌の二成分調節系におけるresponse regulatorと相同性が高く、ウェルシュ菌でも他にコラゲナーゼ、血球凝集素の発現を調節していた。このことからvirR遺伝子はウェルシュ菌における病原因子のグローバルな調節遺伝子と考えられた。3.ウェルシュ菌のvirR遺伝子の変異株の作製に成功した。virR遺伝子の変異株をhomologous recombinationにて作製した。得られた変異株では、pfoA遺伝子、コラゲナーゼ、血球凝集素の発現が消失していた。また、これらの毒素の発現は正常なvirR遺伝子を形質転換することで相補された。

The られた results obtained from the によって research of this year are as follows によって とお であった であった. 1. Youdaoplaceholder0 ウェ シュ シュ the occurrence of で <s:1> theta toxins 伝 (pfoA) ウェ within the bacteria is に successful and た た. ウ ェ ル シ ュ bacteria で copy で き る プ ラ ス ミ ド (pJIR418) へ toxin heritage 伝 child (pfoA) fragment を scions into し, こ れ を ウ ェ ル シ ュ bacteria へ 気 perforation method (electroporation) に よ っ て import し, プ ラ ス ミ ド の on pfoA heritage 伝 son の 発 now を adjustable べ た. こ の プ ラ ス ミ ド を form quality planning in し た ウ ェ ル シ ュ bacteria で は hemolysis activity が rise し, foreign の theta toxin heritage 伝 son が sharper rate よ く 発 now さ れ た と exam え ら れ た. 2. ウ ェ ル シ ュ bacteria で pfoR heritage 伝 child outside の theta - traces of poison 伝 child 発 now adjust but 伝 が ク ロ ー ニ ン グ さ れ た. ウ ェ ル シ ュ bacteria の さ ま ざ ま な theta - toxin production - different strains に お け る theta toxin heritage 伝 son の 発 now を parsing し た results, pfoR heritage 伝 child outside に も theta - traces of poison 伝 son の 発 を now adjust し て い る posthumous son 伝 が exist す る こ と が Ming ら か と な り, こ の new た な adjust heritage 伝 son を directly ウ ェ ル シ に ュ bacteria Youdaoplaceholder0 グ ロ ニ ニ グ た た. こ の heritage 伝 child (virR) は, bacteria の composition adjustment system に お け る response regulator と identity が く, ウ ェ ル シ ュ bacteria で も he に コ ラ ゲ ナ ー ゼ, blood agglutinin の 発 を adjust now し て い た. こ の こ と か ら virR posthumous son 伝 は ウ ェ ル シ ュ bacteria に お け る pathogenic factor の グ ロ ー バ ル な adjust heritage 伝 son と exam え ら れ た. 3. The production of the 伝 variant strain <e:1> of the 伝 virR remnant of the ウェ シュ シュ strain シュ was successfully completed に た た. virR 伝 subvariant をhomologous recombinationにて preparation <s:1> た. The られた variant strain で で, pfoA remnant 伝, コラゲナ られた ゼ ゼ, hemagglutinin が appears and が disappears, て た た た た. ま た, こ れ ら の toxin の is は 発 the normal な virR posthumous son 伝 を form quality planning in す る こ と で phase fill さ れ た.