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ウェルシュ菌における病原因子のグローバル制御機構の解析

产气荚膜梭菌毒力因子整体调控机制分析

基本信息

批准号：
06770194
负责人：
清水徹
金额：
$ 0.58万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770194/
关键词：
C.pertringens 遺伝子発現調節三成分制御系

项目摘要

申請時に提出した計画書の通りに実験を行ない、以下の結果を得たので報告する。1.ウェルシュ菌染色体ライブラリーの作製シャトルベクターpJIR418のHindIII切断部位へ、ウェルシュ菌strain13の染色体をHindIIIに部分分解した3-7kbの断片を挿入し、大腸菌へ形質転換して染色体ライブラリーを作製した。得られた大腸菌コロニーを集菌し、プラスミドDNAを大量調整して以下の実験に用いた。ライブラリーより96穴マイクロタイタ-プレートを用いてプラスミドを計1,200個調製し、フィルターメンブラン上へそれぞれをブロットして変性後、スクリーニングに用いた。2.ウェルシュ菌virR遺伝子により転写レベルで調節される遺伝子群の同定ウェルシュ菌strain 13とそのvirR遺伝子変異株TS133株より全RNAを調製し、それぞれをrandom primer、[α-^<32>P]dCTR、AMV reverse transcriptaseを用いてラベルした。前述のライブラリーをブロットしたフィルターに対してこれらのプローブをハイブリダイゼーションし、strain13とTS133のプローブでハイブリダイズした放射活性を比較し、明らかに活性の異なるクローンを選択した。計15個のクローンが選択され、そのうちstrain13の方が強いものが9個、TS133の方が強いものが6個であった。このことは、得られたクローンのうち9個がvirRによって正に調節され、残りの6個は負に調節される遺伝子を含んでいる可能性を示している。これらのクローンのプラスミドDNAを調べたところ、全て異なる長さのDNA断片を含んでおり、virRによって調節される複数の遺伝子群がクローニングされたと思われる。今後、これらのクローンについてさらなる解析を行っていきたい。

The following results were reported during the submission of the proposal 1. Chromosome fragmentation of E. coli strain 418 and HindIII fragment of E. coli strain13. Chromosome fragmentation of E. coli A large number of adjustments have been made to the use of E. coli. The 96-hole switch has 1,200 adjustments, and the switch has been changed. 2. The gene expression of the virR gene was modulated by random primer,[α-^<32>P]dCTR and AMV reverse transcriptase. The above-mentioned "white" and "white" are the most important parts of the "white" and "white" in the world. There are 15 options, 13 options, 9 options, and 133 options. 9 virR positive regulators, 6 virR negative regulators, 9 virR positive regulators, 6 virR negative regulators, 9 virR negative regulators, 9 virR negative The DNA fragments contained in the virR gene are regulated by the virR gene. Now, this is the first time I've ever seen a woman.