ウェルシュ菌における病原因子のグローバル制御機構の解析

产气荚膜梭菌毒力因子整体调控机制分析

• 批准号: 06770194
• 负责人: 清水 徹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770194/
• 关键词: C.pertringens; 遺伝子発現調節; 三成分制御系

申請時に提出した計画書の通りに実験を行ない、以下の結果を得たので報告する。1.ウェルシュ菌染色体ライブラリーの作製シャトルベクターpJIR418のHindIII切断部位へ、ウェルシュ菌strain13の染色体をHindIIIに部分分解した3-7kbの断片を挿入し、大腸菌へ形質転換して染色体ライブラリーを作製した。得られた大腸菌コロニーを集菌し、プラスミドDNAを大量調整して以下の実験に用いた。ライブラリーより96穴マイクロタイタ-プレートを用いてプラスミドを計1,200個調製し、フィルターメンブラン上へそれぞれをブロットして変性後、スクリーニングに用いた。2.ウェルシュ菌virR遺伝子により転写レベルで調節される遺伝子群の同定ウェルシュ菌strain 13とそのvirR遺伝子変異株TS133株より全RNAを調製し、それぞれをrandom primer、[α-^<32>P]dCTR、AMV reverse transcriptaseを用いてラベルした。前述のライブラリーをブロットしたフィルターに対してこれらのプローブをハイブリダイゼーションし、strain13とTS133のプローブでハイブリダイズした放射活性を比較し、明らかに活性の異なるクローンを選択した。計15個のクローンが選択され、そのうちstrain13の方が強いものが9個、TS133の方が強いものが6個であった。このことは、得られたクローンのうち9個がvirRによって正に調節され、残りの6個は負に調節される遺伝子を含んでいる可能性を示している。これらのクローンのプラスミドDNAを調べたところ、全て異なる長さのDNA断片を含んでおり、virRによって調節される複数の遺伝子群がクローニングされたと思われる。今後、これらのクローンについてさらなる解析を行っていきたい。

At the time of application, you should always submit a plan for the bank review, and the following results will receive a report review. 1. The chromosomes of the bacteria were broken down, the chromosomes of the bacteria were broken down, the chromosomes of the bacteria strain13 were partially broken down, the fragments of 3-7kb were partially broken down, the chromosomes of the bacteria were broken down, and the chromosomes of the bacteria were isolated. It is necessary to use a large number of bacteria to collect bacteria and DNA to collect bacteria. There are a total of 1200 people in the hospital. There are a total of 1200 people in the hospital. After the accident, they will be able to use it. two。 The subgroup of virR was identified as the same as that of strain 13, virR, TS133, random primer, [α-^ & lt;32>P] dCTR, and AMV reverse transcriptase. The aforementioned radio activity tests show that the radioactivity ratio is higher than that of the control group, while that of the strain13TS133 device. A total of 15 public housing estates were selected, 9 were elected by strain13 and 6 by TS133. Please tell me that 9 virR messages are correct and 6 disabled. The possibility is indicated by the possibility of failure. This is not true. The DNA fragments are full-length fragments. The DNA fragments contain the data. The virR fragments are duplicated. The sub-group is divided into two groups. From now on, I'll tell you how to parse the line.