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病原細菌の新規染色体複製システムの解明

阐明病原菌的新型染色体复制系统

基本信息

批准号：
24659195
负责人：
清水徹
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24659195/
关键词：
ウェルシュ菌染色体複製ガス壊疽増殖速度細菌

项目摘要

24年度はDNAマイクロアレイを用いた複製中の染色体DNAの定量を行なった。ウェルシュ菌strain 13をGAM培地中にて37°Cで培養を行い、増殖の活発な対数増殖期の染色体DNAを調製し、さらにコントロールとして静止期のDNAを調製した。両DNAを鋳型としCy5 、Cy3でラベルしたcDNAを合成し、ウェルシュ菌DNAマイクロアレイにハイブリダイズさせ、本菌の全遺伝子領域ごとの両増殖時期のDNA量を定量し静止期を分母とした対数増殖期のDNA量を計算した。その結果、対数増殖期の複製開始点 (ori) のDNA量は複製終止点 (ter) よりも2倍程度多く、基本的なori-ter型の複製が進んでいることが示されたが、oriからterに至る途中の領域にもDNA量が多い部分、つまり部分的にDNA複製が起きている可能性のある領域が複数確認された。これらの染色体複製部位を詳細に解析するため、対数増殖期~静止期における時間ごとの変化を解析した。これらの複製部位におけるDNA量は初期では複数の複製開始ピークが見られたが、時間とともにその数と大きさが減少し通常の複製パターンを示していくことが判明した。培養温度を30°C に変化させ増殖速度を抑制すると、通常のori-ter型の複製パターンしか見られなかったことから、複数の複製開始ピークは増殖速度が速い時に現れる現象であることが推察された。さらに独立した実験として、ウェルシュ菌DNA断片をクロラムフェニコール耐性遺伝子に結合させて遺伝子ライブラリーを作成し、ウェルシュ菌に形質転換したところ、本来はDNAを複製できずに耐性菌の生育が見られないはずのところ、多数の菌が生育した。このことはこれらの菌内にあるDNAにDNA複製開始部位が含まれることを示唆しており、ウェルシュ菌DNAには自己複製部位が多数存在することが強く考えられた。

In the year 24, the chromosome DNA was quantified in DNA copies. In the culture of strain 13 GAM, the colonization was carried out at 37 °C, and the reproductive stage was counted. The chromosomes of DNA were isolated from the culture, and the resting stage of DNA was detected. DNA, Cy3, cDNA, DNA, DNA, cDNA, DNA, DNA synthesis, DNA synthesis, DNA quantification, quantitative calculation, quantitative calculation and calculation. The result of the test, the start point of the replication period (ori), the replication termination point of the DNA quantity (ter), the basic ori- replication replication, the ori replication on the way from the ter to the terminal, the DNA replication possibility and the confirmation of the domain replication on the way. The chromosome replication site was analyzed by PCR, and the time from the reproductive phase to the resting phase was analyzed by PCR. During the initial phase of the DNA replication, the replication starts. The number of copies is large, and the number of copies is low. Usually, the copy is displayed to verify the error. The incubation temperature is 30 °C. the reproduction rate is suppressed, usually the ori- type is replicated, and the replication is started. When the reproduction speed is fast, the virus is detected. The DNA fragments were isolated, the bacteria were copied, the resistant bacteria were born, and most of the bacteria were born. In the beginning of DNA DNA replication in bacteria, there was a positive reaction in the beginning of the replication, and most of them were found in the part where DNA was copied itself.