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病原細菌の新規染色体複製システムの解明

阐明病原菌的新型染色体复制系统

基本信息

批准号：
24659195
负责人：
清水徹
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24659195/
关键词：
ウェルシュ菌染色体複製ガス壊疽増殖速度細菌

项目摘要

24年度はDNAマイクロアレイを用いた複製中の染色体DNAの定量を行なった。ウェルシュ菌strain 13をGAM培地中にて37°Cで培養を行い、増殖の活発な対数増殖期の染色体DNAを調製し、さらにコントロールとして静止期のDNAを調製した。両DNAを鋳型としCy5 、Cy3でラベルしたcDNAを合成し、ウェルシュ菌DNAマイクロアレイにハイブリダイズさせ、本菌の全遺伝子領域ごとの両増殖時期のDNA量を定量し静止期を分母とした対数増殖期のDNA量を計算した。その結果、対数増殖期の複製開始点 (ori) のDNA量は複製終止点 (ter) よりも2倍程度多く、基本的なori-ter型の複製が進んでいることが示されたが、oriからterに至る途中の領域にもDNA量が多い部分、つまり部分的にDNA複製が起きている可能性のある領域が複数確認された。これらの染色体複製部位を詳細に解析するため、対数増殖期~静止期における時間ごとの変化を解析した。これらの複製部位におけるDNA量は初期では複数の複製開始ピークが見られたが、時間とともにその数と大きさが減少し通常の複製パターンを示していくことが判明した。培養温度を30°C に変化させ増殖速度を抑制すると、通常のori-ter型の複製パターンしか見られなかったことから、複数の複製開始ピークは増殖速度が速い時に現れる現象であることが推察された。さらに独立した実験として、ウェルシュ菌DNA断片をクロラムフェニコール耐性遺伝子に結合させて遺伝子ライブラリーを作成し、ウェルシュ菌に形質転換したところ、本来はDNAを複製できずに耐性菌の生育が見られないはずのところ、多数の菌が生育した。このことはこれらの菌内にあるDNAにDNA複製開始部位が含まれることを示唆しており、ウェルシュ菌DNAには自己複製部位が多数存在することが強く考えられた。

In the 24th year, はDNAマイクロアレイを was used to quantify chromosomal DNA during replication.ウェルシュ strain 13をGAM Peidichu can be cultured at 37°C, and the growth and reproduction can be carried out during the reproduction period. Chromosome DNAをmodulationし,さらにコントロールとしてquiescent phaseのDNAをmodulationした.両DNAを鋳TypeとしCy5 , Cy3でラベルしたcDNAをsyntheticし, Cy3ェルシュ bacterium DNAマイクロアレイにハイブリダイズさせ, this bacterium The entire genetic subfield is used to quantify the amount of DNA during the reproductive period and calculate the denominator during the resting period.そのresult, number of reproduction period のreplication start point (ori) のDNA amount はreplication end point (ter)よりも2 times as much as the copy, the basic なori-ter type copy が enter んでいることが show されたが, ori ter に to るOn the way, there is a large amount of DNA in the field, and there is a possibility of DNA replication in the field and there is a plurality of confirmations in the field.これらのChromosome replication siteをDetailed analysisするため、対number proliferative~quiescent phaseにおけるtimeごとの変化をanalyticした.これらの copy site におけるDNA amount はInitial stage ではplural のreplication starts ピークが见られたが、time Between the number of とともにその大きさがreduce the usual のcopy パターンをshow していくことが clarificationした. Culture temperature: 30°Cに変化させProliferation speedをSuppressionすると、Normal のori-ter type のreplication パターンしか见られなかったことから、plural のreplication start ピークは multiplying speed がspeed い时にappears れるphenomenon であることがspecify された.さらに independent した実験として, ウェルシュDNA fragment をクロラムフェニコールPatience 伝子に Combined with させて伝子ライブラリーを Made し, ウェルシュ bacterium に morphological change したところ, original はDNA を duplication できずResistant bacteria are resistant to growth, and many bacteria are growing.このことはこれらのDNA within the bacterium にあるDNA replication start site がcontaining まれることをshows instructions しThere are many parts of the DNA of ており and ウェルシュ bacteria that copy themselves, and することが强く考えられた.