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大腸菌耐熱性下痢原因毒素Iの分泌とプロセッシング

大肠杆菌耐热腹泻毒素I的分泌及加工

基本信息

批准号：
06770212
负责人：
山中浩泰
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokushima Bunri University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌耐熱性下痢原因毒素I(STI)は、菌体外に積極的に分泌されるペプタイドである。本毒素は、72個のアミノ酸から成る前駆体として生合成され、その構造は、pre領域,pro領域及びmature領域の3領域から成っている。これまでの研究により、pro領域の存在がSTIの効率の良い内膜通過を引き起こすこと,活性構造構築に必要な分子内のジスルフィド結合の形成は,DsbAと呼ばれるペリプラスム酵素によって促進されることを明らかにした。本年度は、ジスルフィド結合形成と外膜通過との関連性及び外膜を通過しうる分子の大きさについてパルスラベル実験を行い、以下の知見を得た。1.培地中に放出されるSTIは、mature領域のみから構成されており、pro-mature領域から構成されるSTIは分泌されなかった。また短いチェイス時間では、ペリプラスム中にもmature領域のみからなるSTIが局在した。これらの結果より、シグナルペプタイド(pre領域)の切断後、ペリプラスム中へ移行したSTI(pro-mature領域で構成)はプロセッシングを受け、mature領域からなるSTIだけが外膜を通過することが明らかとなった。2.STIの末端側のアミノ酸を37個伸長すると、毒素の分泌量が低下した。また培地中に放出された分子を分析した結果、菌体外へ毒素が分泌されるためには、伸長部位が切断を受けなくてはならないことが判明した。3.mature領域中に存在するシステイン残基をアミノ酸置換した変異毒素産生株やdsbA遺伝子欠損株を用いた結果、STIの分子内ジスルフィド結合は毒素の外膜通過にとって必ずしも必要ではないことが判明した。

E. coli heat-resistant diarrhea causative toxin I(STI) is actively secreted in vitro. The toxin contains 72 amino acid precursors, three structural domains, three pro domains and three mature domains. The existence of such a domain leads to the formation of an enzyme binding in the molecule necessary for the construction of an active structure. This year, the following observations were made on the relationship between the formation of the outer membrane and the passage of the outer membrane 1. STI is released in the cultivation field, formed in the mature field, and secreted in the pro-mature field. The time is short, the time is short, and the time is short. The result of this is that after cutting off, the STI (pro-mature region) is transferred from the top to the bottom, and the STI(pro-mature region) is transferred from the top to the bottom. 2. The terminal side of STI had 37 elongation points, and the secretion of toxin was low. The results of molecular analysis of the release of toxins from the culture medium, the secretion of toxins from the culture medium and the elongation of the culture medium were determined. 3. In the mature domain, there is no acid substitution for isotoxin production. In the case of isotoxin production, there is no acid substitution for isotoxin production. In the case of isotoxin production, there is no acid substitution for isotoxin production. In the case of isotoxin production, there is no acid substitution for isotoxin production.