遺伝子再集合体を用いた血清型1、2、4型ヒトロタウイルスのマウス感染モデルの確立

利用基因重配建立人轮状病毒血清型1、2和4的小鼠感染模型

• 批准号: 05770214
• 负责人: 小林 宣道
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770214/
• 关键词: ヒトロタウイルス; 血清型; 遺伝子再集合体; 単クロン抗体; VP7; VP4

本研究はロタウイルスワクチンの開発と評価に必要な、血清型1、2、4型ウイルスによる動物感染モデルの確立を目的として、マウスへの感染性を有するサルロタウイルスSA11株と感染性のない血清型1、2、4、9型ヒトロタウイルス(HRV)の間で遺伝子再集合体(reassortant)を多数作成し、その遺伝学的特徴を解析した。1.SA11株と血清型1(KU株)、血清型2(DS-1株,HN126株),血清型4(Hochi株),尾よび血清型9(WI61株)HRVをそれぞれMA-104細胞に混合感染させた後、培養液を血清型3特異的中和単クロン抗体とHRV株とのみ反応する抗VP4中和単クロン抗体の存在下で培養を3回繰り返した。抗体による選択を経た培養液を用いてプラークをランダムに40クローンづつ分離、培養し、それぞれのクローンにおける11本の分節RNAの由来と抗原性を解析した。2.得られた計200のウイルスクローンはいずれもVP7がHRVに由来し、VP4がSA11に由来する抗原モザイク型遺伝子再集合体であることが確認された。また、SA11とHRV KU株,Hochi株,WI61株間での遺伝子再集合体では5種類のgenotypeが見られたのに対し、DS-1株,HN126株との間ではそれぞれ17,11種類のgenotypeが検出され、SA11と混合感染させたHRVの種類により、分節RNAの親株からの選択の様式には違いがあることが示唆された。得られた遺伝子再集合体ではVP7遺伝子以外の多くのRNA分節はSA11に由来する傾向が見られたが、gene5のみはHRVからの選択率が他に比して有為に高かった。3.得られた遺伝子再集合体のうち、SA11/KU-R1,SA11/DS1-R1,SA11/Hochi-R1はVP7遺伝子のみがそれぞれ血清型1,2,4型HRVに由来し、他の遺伝子はすべてSA11由来の単一遺伝子reassortantであることが判明した。これらの株はHRVの異なる血清型を有しつつも親株SA11と同様にマウスへの感染性を持つ可能性が高い。これらの遺伝子再集合体のマウスでの感染性、下痢起因性については現在詳細な検討を進めている。

In this study, we determined the genetic characteristics of most of the resortants of serotypes 1, 2, 4 and SA11 for the development and evaluation of HRV infection in animals. 1. MA-104 cells were co-infected with SA11 strain, serotype 1(KU strain), serotype 2(DS-1 strain, HN126 strain), serotype 4(Hochi strain), and serotype 9(WI61 strain)HRV and cultured in the presence of neutralizing antibodies specific for serotype 3 and anti-VP4 neutralizing antibodies for 3 cycles. Antibody selection and culture medium were used to isolate, culture, and analyze the origin and antigenicity of this segmented RNA. 2. It was found that the 200-year-old virus was identified by VP7 and SA11. The genotype of 5 species was found in the reassembly of HRV, SA11, KU,Hochi, WI61 strains, DS-1 and HN126 strains, respectively. The genotype of 17 and 11 species was found in the reassembly of HRV, SA11, KU, Hochi and WI61 strains, respectively. There is a tendency for RNA fragments other than VP7 to be more abundant than SA11 in gene5 and HRV than in other genes. 3. The genetic reassortment of SA11/KU-R1, SA11/DS1-R1, SA11/Hochi-R1 VP7 was identified. The genetic reassortment of SA11/DS1-R1, SA11/Hochi-R1 VP7 was identified. The possibility of infection of the parental strain SA11 is high. This paper discusses the infection and diarrhea causative factors of the recombinant DNA of the virus.