免疫細胞における低分子量GTP結合蛋白質の機能

低分子量 GTP 结合蛋白在免疫细胞中的功能

• 批准号: 05770224
• 负责人: 幸田 敏明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770224/
• 关键词: 低分子量G蛋白質; リンパ球; マクロファージ; 細胞内小胞輸送

1.ヒトT細胞株Jurkatから得たcDNAクローンS10について、他の低分子量GTP結合蛋白質とアミノ酸配列を比較した結果、細胞内小胞輸送に関与するrabグループに属する可能性が高いことを明らかにした。2.S10の種々のヒト培養細胞における発現を調べた結果、T及びBリンパ球と一部の単球系細胞株においてのみその発現が認められ、免疫系の細胞(の一部)に特異的に発現する遺伝子であることを明らかにした。3.S10のcDNAを大腸菌の発現ベクターに組み込み、マルトース結合蛋白あるいはグルタチオンSトランスフェラーゼとの融合蛋白として、大量にS10蛋白質を合成し、分離精製した。この蛋白をウサギに免疫して抗血清を得て、さらにS10に特異的な抗体を精製した。この抗体は、ヒトのS10は認識できたが、マウスのS10は認識できなかった。4.S10蛋白質が、細胞内の膜画分及び細胞質画分に多く存在し、核には少ないことを明らかにした。5.S10のcDNAに恒常的活性型及び優性抑制型の突然変異を導入し、それぞれの変異S10蛋白質を発現するプラスミドを構築した。IL2プロモーターにCAT遺伝子をつないだプラスミドをレポーターとしてJurkat細胞にコトランスフェクト実験を行い、これらの変異S10蛋白質のT細胞活性化に及ぼす影響をIL2プロモーターの活性化を指標として調べた結果、T細胞活性化には影響しないことが明らかとなった。

1. ヒ ト Jurkat T cell lines か ら have た cDNA ク ロ ー ン S10 に つ い て, he の low molecular weight GTP binding protein made と ア ミ ノ acid with column を compare し た results, intracellular vesicular transport に masato and す る rab グ ル ー プ に genus す likely が る い こ と を Ming ら か に し た. 2. S10 の kind 々 の ヒ ト culture cell に お け る 発 now を adjustable べ た results, T and B び リ ン パ ball と a の 単 ball is cell lines に お い て の み そ の 発 が now recognize め ら れ, immune cell の (の a) に specific に 発 now す る heritage 伝 son で あ る こ と を Ming ら か に し た. 3. S10 の cDNA を coliform の 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, マ ル ト ー ス binding protein あ る い は グ ル タ チ オ ン S ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ と の fusion protein と し て, massive に し を S10 protein synthesis, separation of refined し た. こ の protein を ウ サ ギ に immune し て antiserum を て, さ ら に S10 に specific antibody を な refined し た. <s:1> <s:1> antibody <e:1>, ヒト <s:1> S10 <e:1> recognition で たが たが, <s:1> ウス <s:1> S10 <e:1> recognition で な な な った った. 4. の が S10 protein, cell membrane drawing points and び cytoplasm points に く し, more nuclear に は less な い こ と を Ming ら か に し た. 5. S10 の cDNA に constant active type and び optimum inhibitory の suddenly - different を import し, そ れ ぞ れ の - different S10 protein を 発 now す る プ ラ ス ミ ド を build し た. Traces of IL2 プ ロ モ ー タ ー に CAT son 伝 を つ な い だ プ ラ ス ミ ド を レ ポ ー タ ー と し て Jurkat cells に コ ト ラ ン ス フ ェ ク ト be 験 を い, こ れ ら の - different S10 protein の T cell activation and ぼ に す influence を IL2 プ ロ モ ー タ ー の activeness を index と し て adjustable べ た results, T cell activation に は influence Youdaoplaceholder0 な となった とが Ming ら となった となった.