ズリ応力誘発血小板凝集における細胞内二次伝達物質の検討

剪切应力诱导血小板聚集的细胞内次级介质的研究

基本信息

批准号：
05770483
负责人：
後藤信哉
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ズリ応力負荷時の血小板内カルシウムイオン濃度の変化カルシウムイオン感受性の蛍光色素(Indo-1)を用いて血小板内カルシウムイオン濃度を計測した。高ズリ応力(108 dynes/cm^2)負荷時には凝集とともに血小板内カルイムイオン濃度は250±49nM上昇した。低ズリ応力(12 dynes/cm^2)負荷時には血小板凝集、カルイウムイオン濃度の変化、いずれも認められなかった(Ikeda Y,et al.Thromb Haemost 69:496,1993,Goto S,et al.Am Heart J投稿中)。2.少量エピネフリンの効果(1)高ズリ応力負荷時ズリ応力負荷に先立ち、血小板浮遊液に、終濃度が10ng/mlとなるように少量のエピネフリンを添加した。高ズリ応力負荷による血小板の凝集は添加前の49±10%から、エピネフリン添加後には70±7%に増加した。250±49nMであったズリ応力負荷後の細胞内カルシウムイオン濃度上昇も、エピネフリン添加後には404±134nMに増加した。ズリ応力による凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともにalpha2受容体阻害薬であるヨヒンビンにより用量依存性に抑制された。またvon Willebrand factor(vWF)と血小板膜糖蛋白GPIbの結合を抑制する抗体(nmc-4またはGVR20-5)により凝集、カルシウム濃度変化ともに完全に抑制された。(2)低ズリ応力負荷時エピネフリン添加前にはズリ応力負荷による凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともに認められなかったが、エピネフリン添加後には66±17%の血小板凝集を認めた。この際細胞内カルシウムイオン濃度も50±17nM上昇した。エピネフリン存在下の、低ズリ応力誘発血小板凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともにヨヒンビンにより用量依存性に抑制された。またvWFとGPIbの結合を抑制する抗体により、凝集、カルシウムイオン濃度変化ともにほぼ完全に抑制されたことから、エピネフリン存在下では、低ズリ応力負荷時にも、vWFとGPIbのinteractionにより仲介される血小板の活性化、血小板凝集が起こることが示唆された。エピネフリン刺激によりGPIbの高次構造が変化し、ズリ応力に対する感受性が高くなることがその原因と推論された(Goto S,et al.Am Heart J投稿中)。

1。在硫应激下负载下血小板中钙离子浓度的变化使用钙离子敏感的荧光染料（Indo-1）测量血小板中的钙离子浓度。在高消耗应力（108 dynes/cm^2）载荷期间，骨架内的骨内骨离子浓度增加了250±49nm，聚集在一起。在低消耗胁迫（12 dynes/cm^2）载荷期间，未观察到血小板聚集或钙离子浓度的变化（Ikeda Y等。 2。在高液压应力载荷期间硫酸盐应力加载之前的少量肾上腺素（1）的影响，将少量肾上腺素添加到血小板悬浮液中，以使最终浓度为10 ng/ml。由于肾上腺素添加后增加到70±7％，由于高消耗应力加载而导致的血小板聚集增加了。加载硫应激后250±49nm后，细胞内钙离子浓度的增加，加入肾上腺素后也增加到404±134nm。由硫应激引起的聚集和细胞内钙离子浓度的变化均被α2受体抑制剂Yohimbine抑制剂量依赖性。此外，聚集和钙浓度变化都被抗体（NMC-4或GVR20-5）完全抑制，该抗体抑制了von Willbrand因子（VWF）和血小板膜糖蛋白GPIB的结合。（2）在在低消耗胁迫下添加肾上腺素之前，均未观察到由于钝应激引起的聚集或细胞内钙离子浓度的变化，但是在添加肾上腺素后，观察到血小板聚集66±17％。目前，细胞内钙离子浓度也增加了50±17nm。在存在肾上腺素的情况下，Yohimimbine以剂量依赖性的方式抑制了低消除应力诱导的血小板聚集和细胞内钙离子浓度的变化。此外，抑制VWF和GPIB结合的抗体几乎完全抑制了聚集和钙离子浓度的变化，这表明即使在存在肾上腺素的情况下施加了应力，即使在施加应力时，血小板激活和血小板聚集也是由VWF和GPIB之间的相互作用介导的。据推断，这样做的原因是肾上腺素刺激改变了GPIB的高阶构象，从而增加了对闷闷不乐应力的敏感性（在Goto s等人的邮政等。