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ズリ応力誘発血小板凝集における細胞内二次伝達物質の検討

剪切应力诱导血小板聚集的细胞内次级介质的研究

基本信息

批准号：
05770483
负责人：
後藤信哉
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ズリ応力負荷時の血小板内カルシウムイオン濃度の変化カルシウムイオン感受性の蛍光色素(Indo-1)を用いて血小板内カルシウムイオン濃度を計測した。高ズリ応力(108 dynes/cm^2)負荷時には凝集とともに血小板内カルイムイオン濃度は250±49nM上昇した。低ズリ応力(12 dynes/cm^2)負荷時には血小板凝集、カルイウムイオン濃度の変化、いずれも認められなかった(Ikeda Y,et al.Thromb Haemost 69:496,1993,Goto S,et al.Am Heart J投稿中)。2.少量エピネフリンの効果(1)高ズリ応力負荷時ズリ応力負荷に先立ち、血小板浮遊液に、終濃度が10ng/mlとなるように少量のエピネフリンを添加した。高ズリ応力負荷による血小板の凝集は添加前の49±10%から、エピネフリン添加後には70±7%に増加した。250±49nMであったズリ応力負荷後の細胞内カルシウムイオン濃度上昇も、エピネフリン添加後には404±134nMに増加した。ズリ応力による凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともにalpha2受容体阻害薬であるヨヒンビンにより用量依存性に抑制された。またvon Willebrand factor(vWF)と血小板膜糖蛋白GPIbの結合を抑制する抗体(nmc-4またはGVR20-5)により凝集、カルシウム濃度変化ともに完全に抑制された。(2)低ズリ応力負荷時エピネフリン添加前にはズリ応力負荷による凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともに認められなかったが、エピネフリン添加後には66±17%の血小板凝集を認めた。この際細胞内カルシウムイオン濃度も50±17nM上昇した。エピネフリン存在下の、低ズリ応力誘発血小板凝集、細胞内カルシウムイオン濃度変化ともにヨヒンビンにより用量依存性に抑制された。またvWFとGPIbの結合を抑制する抗体により、凝集、カルシウムイオン濃度変化ともにほぼ完全に抑制されたことから、エピネフリン存在下では、低ズリ応力負荷時にも、vWFとGPIbのinteractionにより仲介される血小板の活性化、血小板凝集が起こることが示唆された。エピネフリン刺激によりGPIbの高次構造が変化し、ズリ応力に対する感受性が高くなることがその原因と推論された(Goto S,et al.Am Heart J投稿中)。

1. Changes in platelet concentration during stress loading were measured using sensitive fluorescent pigment (Indo-1). High platelet aggregation (108 dynes/cm^2) increased platelet concentration by 250±49nM. The platelet aggregation, concentration, and color changes were observed at low concentrations (12 dynes/cm^2)(Ikeda Y,et al. Thromb Haemost 69:496,1993,Goto S,et al. Am Heart J). 2. A small amount of vitamin C was added to the platelet suspension at a concentration of up to 10ng/ml. Platelet aggregation under high stress loads increased from 49±10% before the addition of Epiricin, and increased from 70±7% after the addition of Epiricin. Intracellular concentrations increased from 250±49nM to 404±134nM after stress loading. The concentration of the protein in the cell is dependent on the concentration of the protein. Antibodies (nmc-4 and GVR20-5) that inhibit binding of von Willebrand factor(vWF) to platelet membrane glycoprotein GPIb completely inhibit aggregation and concentration changes. (2)Platelet aggregation was 66±17% before and after the addition of low stress load, low stress load, low stress load. At this time, the intracellular concentration increased by 50±17nM. In the presence of platelet aggregation, low concentration of platelet induced platelet aggregation, intracellular concentration of platelet induced platelet aggregation and dose-dependent inhibition of platelet aggregation. The binding of vWF to GPIb is inhibited by antibody, aggregation, and platelet aggregation. The binding of vWF to GPIb is inhibited completely by antibody, aggregation, and platelet aggregation. The reasons for the high sensitivity of GPIb to stimuli are discussed (Goto S,et al. Am Heart J).