クモ膜下出血後の攣縮血管におけるCalcium Homeostasisの検討-蛍光指示薬Fura2を用いた研究-

蛛网膜下腔出血后痉挛血管钙稳态的检查 - 使用荧光指示剂 Fura2 的研究 -

• 批准号: 05771010
• 负责人: 好本 裕平
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771010/
• 关键词: くも膜下出血; 脳血管攣縮; カルシウム; fura-2

〔目的〕これまでに明らかにされたクモ膜下出血後の攣縮血管壁中の高エネルギーリン酸の低下と、持続的な収縮とを結びつける機序を解明するため、おける平滑筋のCalciumの膜透過性の変化を蛍光指示薬fura-2を用いて検討した。〔方法〕Double hemorrhage canine modelを用い、取り出した脳底動脈片に、fura-2にアセトキシメチル基を付けた膜透過性のfura-2/AMを3時間、少量の界面活性剤の存在下に負荷した。内皮を剥いだ血管片に内側より紫外線を当て、2波長励起下の蛍光度F340、F356およびその比(R)をmonitorした。F356は細胞内Calcium濃度に関係ないdye lossの指標とした。controlとして非出血犬より取り出した動脈を用いた。細胞膜のカルシウム透過性の変化を観るため、Ca^<++>-EGTAbufferを用い細胞外のカルシウム濃度を低濃度より段階的に上昇させた(pCa8-2)時のR値の変化を観た。また同様の測定をすべてをinomycinの存在下、すなわちカルシウムに対し膜を透過性にした状態で繰り返し測定した。〔結果〕正常血管、攣縮血管共に細胞外のCa^<++>濃度の上昇に伴ってR値、即ち細胞内Ca^<++>濃度は上昇したが、curveは出血犬で左方移動しており外液変化による細胞内calciumの上昇が起こりやすい事が示された。またcalciumに対し膜を透過性にしたionomycin処理の影響を観てみると、正常血管ではionomycinの処理によってcurveは攣縮血管のpatternに近づいたが、攣縮血管ではionomycinの効果は非常に小さかった。すなわち攣縮血管ではionomycin処理と類似の変化が既に起こっている可能性が示唆された。〔結論〕クモ膜下出血後の攣縮血管では平滑筋細胞膜のcalcium透過性が亢進し、calcium homeostasisに大きな変化が起こっていることが示唆された。

[Objective] To investigate the mechanism of the decrease and persistence of Calcium in contractile vascular wall after submembranous hemorrhage, and to investigate the use of fura-2 as an indicator of membrane permeability. [Method] Double hemorrheology canine model was used in the presence of a small amount of interfacial active agent under load in the presence of fura-2 and fura-2. Endothelium-free blood vessels inside the film, ultraviolet light, 2-wavelength excitation under the luminosity F340, F356, and the ratio (R) monitor F356 is an indicator of intracellular Calcium concentration. Control is not a problem. Changes in permeability of cell membrane were observed when Ca^++>-EGTA buffer was used in extracellular cell membrane concentration, low concentration, high level and low (pCa8 -2) concentration. In the presence of inomycin, the membrane permeability is measured. [Results] The increase of extracellular Ca ^++> concentration in normal and contractile vessels was accompanied by an increase in intracellular Ca^++> concentration. The effect of calcium on membrane permeability and ionomycin treatment is very small. The possibility of vascular contracture induced by ionomycin treatment is discussed. [Conclusion] The contracture of blood vessels after submembranous hemorrhage was caused by the increase of calcium permeability in smooth muscle cell membrane, and the increase of calcium homeostasis.

项目成果

Y Yoshimoto et al: "Time course in reduction of adenosine phosphates in the canine Cerebral arteries during chronic vasospasm" Cerebral Vasospasm 8 Findley JM(ed) Else vier. (in press). (1993)

Y Yoshimoto 等人：“慢性血管痉挛期间犬脑动脉中磷酸腺苷减少的时间过程”脑血管痉挛 8 Findley JM(ed) Else vier。