ヒトドレブリンE遺伝子導入細胞による神経再生機能解析

人drebrin E基因转染细胞神经再生功能分析

• 批准号: 05771040
• 负责人: 戸田 正博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771040/
• 关键词: ドレブリン; 神経再生; 遺伝子導入; アクチン結合蛋白質

我々はすでにヒト胎児脳cDNA-lambdagt11ライブラリー(Clontec Labs,CA)より、human drebrin EcDNAを単離し、全塩基配列を決定した。そこで今回、得られたhuman drebrin EcDNAをbetaアクチンプロモーターを有するpMIW-HEPのEcoR V siteおよびmetallotionein-Iプロモーターを有するpMITID13SのHind III siteに挿入した。この発現ベクターをneomycineresistant geneであるpSTB-neoと共に、燐酸カルシウム共沈法に従い、Lcellにco-transfectした。G418によりselectionを行い、ドレブリンE遺伝子導入細胞をcloningしてtransformantを得た。そこで今後、非神経細胞であるLcellに対する、ドレブリンEのもつ神経突起形成作用、アクチンやチュブリン等の細胞骨格蛋白質との相互作用を、ドレブリンAの機能との比較を中心に検討する予定である。抗ドレブリン抗体(M2F6),NBD-phallacidin抗体、抗チュブリン抗体を用いた免疫染色、Western blot解析により、細胞の形態変化およびそれぞれの蛋白発現量の変化を解析する。一方、antisense human drebrinE発現ベクター(pMTID13S/Hind III site)を作製し、pSTB-neoと共にSH-SY5Y cellにco-transfectし、antisense drebrin E transfectantを得た.さらに上記と同様に、その細胞形態変化および蛋白発現量の変化を解析する予定である.

We are the first to determine the full sequence of human dreblin EcDNA. The EcoR V site of pMIW-HEP and the Hind III site of pMITID13S are included. This discovery of neomycineresistant gene is based on pSTB-neo co-precipitation, L-cell co-transfection and phosphate co-precipitation. G418 gene cloning and transformant cloning In the future, the interaction between cellular proteins such as L-cell interaction, neurogenesis and neurogenesis in non-neuronal cells, and the comparison of functions of L-cell A are discussed in detail. Anti-delebrinin antibody (M2F6),NBD-phallacidin antibody, and anti-delebrinin antibody were used for immunostaining and Western blot analysis to analyze changes in cell morphology and changes in the amount of protein detected in the cells. One side, antisense human drebrinE found in the box (pMTID13S/Hind III site), pSTB-neo and SH-SY5 Y cell co-perfect, antisense drebrin E transfectant. The above is an analysis of the changes in cell morphology and protein production.

项目成果

Masahiro Toda: "Molecular clouing of cDNA encoding human drebrin E and chromosomal mapping of its gene." Biochemical and Biophysical Reseach Communications. 196. 468-472 (1993)

Masahiro Toda：“编码人 Drebrin E 的 cDNA 的分子克隆及其基因的染色体图谱。”