ヒトドレブリンE遺伝子導入細胞による神経再生機能解析

人drebrin E基因转染细胞神经再生功能分析

• 批准号: 05771040
• 负责人: 戸田 正博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771040/
• 关键词: ドレブリン; 神経再生; 遺伝子導入; アクチン結合蛋白質

我々はすでにヒト胎児脳cDNA-lambdagt11ライブラリー(Clontec Labs,CA)より、human drebrin EcDNAを単離し、全塩基配列を決定した。そこで今回、得られたhuman drebrin EcDNAをbetaアクチンプロモーターを有するpMIW-HEPのEcoR V siteおよびmetallotionein-Iプロモーターを有するpMITID13SのHind III siteに挿入した。この発現ベクターをneomycineresistant geneであるpSTB-neoと共に、燐酸カルシウム共沈法に従い、Lcellにco-transfectした。G418によりselectionを行い、ドレブリンE遺伝子導入細胞をcloningしてtransformantを得た。そこで今後、非神経細胞であるLcellに対する、ドレブリンEのもつ神経突起形成作用、アクチンやチュブリン等の細胞骨格蛋白質との相互作用を、ドレブリンAの機能との比較を中心に検討する予定である。抗ドレブリン抗体(M2F6),NBD-phallacidin抗体、抗チュブリン抗体を用いた免疫染色、Western blot解析により、細胞の形態変化およびそれぞれの蛋白発現量の変化を解析する。一方、antisense human drebrinE発現ベクター(pMTID13S/Hind III site)を作製し、pSTB-neoと共にSH-SY5Y cellにco-transfectし、antisense drebrin E transfectantを得た.さらに上記と同様に、その細胞形態変化および蛋白発現量の変化を解析する予定である.

We are the first to determine the full sequence of human dreblin EcDNA. The EcoR V site of pMIW-HEP and the Hind III site of pMITID13S are included. This discovery of neomycineresistant gene is based on pSTB-neo co-precipitation, L-cell co-transfection and phosphate co-precipitation. G418 gene cloning and transformant cloning In the future, the interaction between cellular proteins such as L-cell interaction, neurogenesis and neurogenesis in non-neuronal cells, and the comparison of functions of L-cell A are discussed in detail. Anti-phallactin antibody (M2F6), NBD-phallactin antibody, anti-phallactin antibody were analyzed by immunostaining, Western blot analysis, cell morphology and protein production. One side, antisense human drebrinE found in the box (pMTID13S/Hind III site), pSTB-neo and SH-SY5 Y cell co-perfect, antisense drebrin E transfectant. The above is an analysis of the changes in cell morphology and protein production.

项目成果

Masahiro Toda: "Molecular clouing of cDNA encoding human drebrin E and chromosomal mapping of its gene." Biochemical and Biophysical Reseach Communications. 196. 468-472 (1993)

Masahiro Toda：“编码人 Drebrin E 的 cDNA 的分子克隆及其基因的染色体图谱。”