患者血清を用いたSEREX法による脳腫瘍特異抗原遺伝子の単離の試み

尝试使用患者血清通过 SEREX 方法分离脑肿瘤特异性抗原基因

基本信息

批准号：
11770773
负责人：
戸田正博
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

悪性脳腫瘍(グリオーマ)は極めて治療困難な疾患であり、新たな治療法の開発が強く望まれている。本研究では、グリオーマに対する新しい免疫療法の開発を目的として、癌患者血清で患者自身の癌細胞を検索する方法に、分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法によるヒトグリオーマ特異的抗原遺伝子の単離を試みた。2種類のグリオーマ細胞株からmRNAを抽出し、cDNAを合成した後、λZAPIIファージに組み込みcDNA libraryを作製した。患者血清一人あたり5x10^5個のファージをプレーティングした後、ニトロセルロース膜にプロットし、グリオーマ患者血清(1:100希釈)と反応させて、陽性クローンを単離した。12人のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングした結果、92個の陽性クローンを単離した。塩基配列解析により、それらの抗原は52種類の遺伝子をコードしていることが明らかになった。さらに単離された抗原を、様々な患者(グリオーマ患者、他の癌患者、他の脳疾患患者、および健常人)血清中IgGとの反応を解析したところ、 2種の新規遺伝子を含む、7種の遺伝子産物はグリオーマ患者血清とのみ反応を示した。以上、本研究ではSEREX法を用いて、グリオーマ患者血清中IgGに特異的に反応する抗原遺伝子を単離した。

恶性脑肿瘤（神经胶质瘤）极难治疗，并且有强烈的渴望开发新的治疗方法。在这项研究中，我们试图通过使用SEREX（通过重组表达克隆对抗原鉴定抗原鉴定）方法来分离人神经胶质瘤特异性抗原基因，该方法融合了分子生物学技术，以开发新的免疫疗法的神经胶质瘤。从两种类型的神经胶质瘤细胞系中提取mRNA，合成cDNA，并将cDNA整合到λzapii噬菌体中以产生cDNA文库。在每位患者血清的5x10^5噬菌体电镀后，通过在硝酸纤维素膜上绘制阳性克隆，并与胶质瘤患者血清反应（1：100稀释）。使用12名神经胶质瘤患者的筛查显示92个阳性克隆。核序列分析表明，这些抗原编码了52种基因的类型。此外，当各种患者（神经胶质瘤患者，其他癌症患者，其他脑病患者和健康个体）分析分离的抗原对血清IgG分析时，包括两个新基因在内的七个基因产物仅对神经胶质瘤患者血清有反应。在这项研究中，使用SEREX方法分离了神经胶质瘤患者血清中IgG的抗原基因。