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ヒトドレブリンEの神経再生機能解析およびヒトドレブリンAのCDNAクローニング

人drebrin E神经再生功能分析及人drebrin A cDNA克隆

基本信息

批准号：
06771096
负责人：
戸田正博
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771096/
关键词：
ドレブリン神経再生 CDNAクローニング神経突起

项目摘要

ドレブリンは神経細胞の移動や神経突起伸展との関連が示唆されるアクチン結合蛋白質である。ドレブリンE tipeとA typeの違いは挿入配列ins2の有無により、現在までは分化した神経細胞に発現するA typeにおける機能解析を進めてきたが、今回ドレブリンEの神経突起伸展作用について主にアクチンとの相互作用を中心に解析した。一方、現在までラットおよびニワトリにおいてA typeのcDNAがクローニングされているが、A typeを特異的に認識する抗体は得られていない。そこで、ヒトドレブリンA cDNAのクローニングを行うとともに、抗ドレブリンA抗体の作製を目的として実験を行った。我々はすでにhuman drebrin E cDNAをβアクチンプロモーターを有するpMIW-HEP、およびmetallotinein-Iプロモーターを有するpMTID13Sに組み込み、それぞれ非神経細胞であるL cellに導入しtransfectantを得ている。そこでL cellに対する、ドレブリンEのもつ神経突起形成作用、アクチンとの相互作用を検討した。さらに、antisense human drebrin E発現ベクターを作製し、神経芽細胞腫B104cellにtransfectし、antisense drebrin transfectantを得た。さらに、上記と同様にその細胞形態変化および蛋白発現量の変化を解析する予定である。一方、human drebrin Aをクローニングする目的でヒト海馬cDNA-λte10ライブラリーをPCRにてスクリーニングしたところ、human drebrin Aのins2を含むと思われる約700bpのbandを検出した。現在sequence中であるが、ドレブリンAは神経特異性が高く今後さらに神経細胞のマーカーと成り得る抗体の作製を計画している。

The relationship between neuronal cell movement and neuronal process extension is shown in the following table. The analysis of the function of A type in the differentiation of neurons is carried out in the center of the interaction between A type and E type. On the one hand, now that A-type cDNA can be cloned and processed in both remote and remote areas, antibodies that are specific to A-type can be produced. For example, if you want to use a mouse, you can use a mouse to make a mouse. Human dreblin E cDNA is introduced into pMIW-HEP, metallotine-I cDNA and pMTID13S cDNA is introduced into L cells. The interaction between L cell and L cell is discussed. In addition, antisense human drebrin E was found to be able to inhibit the proliferation of B104 cells and antisense drebrin transferase. The changes in cell morphology and protein production are described above. A human drebrin A gene is A 700bp cDNA-λte10 gene, which contains a 700bp DNA fragment. Now the sequence is in the middle of the brain, and the specificity of the brain is high. In the future, the production of antibodies in the brain cells is planned.