ヒト神経膠腫細胞SK-MG-1の産生する細胞成長因子

1.SK-MG-1細胞は無蛋白のMCDB-104培養液で、血清添加条件下とほぼ同速度で増殖し、長期継代できた。無血清の凍結保存は短期間のみ可能であったが、更に良い保存媒体を検討している。2.confluent期の順化培養液は、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞、ヒト線維芽細胞、および、胎児由来のヒト神経膠細胞の増殖をこの順に促進した。この活性物質は、ヘパリンカラムで吸着されない分泌型の新しい“内皮細胞増殖因子"と推定された。限外濾過、クロマトグラフィ、電気泳動の各階段を経て、バイオアッセイ(血管内皮細胞の増殖促進活性)によって精製濃縮した。得られた30-40kDaの活性物質のアミノ酸配列を決定しようと試みているが、N末端がblockされており、数回の試行を行うも、物質の同定に至っていない。3.SK-MG-1細胞自体に働くautocrine活性因子として、無蛋白の培養液で半永続的に継代を可能成らしめているpositive因子と、順化培養液を加えることで、自分自身の増殖を阻害するnegative因子が確認されている。前者は、或る細胞密度(ca.5×10^3/cm^2)以下の培養で集団倍化時間が長いことでも存在が確認され、低密度培養によるアッセイ系を検討している。後者は、dishをgelatin coatしたり、基礎培養液に血清を加えることで活性が抑えられ、細胞接着に関した因子を含むと考えられた。4.これらの因子の主体は、SK-MG-1細胞が分泌することが明らかになっているTGF-beta、PDGF-analogとは異なる物質と思われる。

1.SK-MG-1細胞は無蛋白のMCDB-104培養液で、血清添加条件下とほぼ同速度で増殖し、長期継代できた。無血清の凍結保存は短期間のみ可能であったが、更に良い保存媒体を検討している。2.confluent期の順化培養液は、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞、ヒト線維芽細胞、および、胎児由来のヒト神経膠細胞の増殖をこの順に促進した。この活性物質は、ヘパリンカラムで吸着されない分泌型の新しい“内皮細胞増殖因子"と推定された。限外濾過、クロマトグラフィ、電気泳動の各階段を経て、バイオアッセイ(血管内皮細胞の増殖促進活性)によって精製濃縮した。得られた30-40kDaの活性物質のアミノ酸配列を決定しようと試みているが、N末端がblockされており、数回の試行を行うも、物質の同定に至っていない。3.SK-MG-1細胞自体に働くautocrine活性因子として、無蛋白の培養液で半永続的に継代を可能成らしめているpositive因子と、順化培養液を加えることで、自分自身の増殖を阻害するnegative因子が確認されている。前者は、或る細胞密度(ca.5×10^3/cm^2)以下の培養で集団倍化時間が長いことでも存在が確認され、低密度培養によるアッセイ系を検討している。後者は、dishをgelatin coatしたり、基礎培養液に血清を加えることで活性が抑えられ、細胞接着に関した因子を含むと考えられた。4.これらの因子の主体は、SK-MG-1細胞が分泌することが明らかになっているTGF-beta、PDGF-analogとは異なる物質と思われる。