プロテオグリカン糖鎖に対するモノクロナール抗体の作製と免疫細胞化学的検索

蛋白聚糖糖链单克隆抗体的制备及免疫细胞化学搜索

基本信息

批准号：
05771467
负责人：
柴田俊一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1994
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771467/
关键词：
プロテオグリカンモノクロナール抗体

项目摘要

糖鎖解析のためのHPLCカラムが到着した8月よりモノクロナール抗体作製のための抗原の精製に取掛かった。はじめに通法にしたがって、プロテオグリカン分子をSwarm Rat軟骨肉腫からCsClの密度勾配遠心にて精製し、引き続いてchondroitinase ACIIをprotease inhibitorとともにプロテオグリカン分子に作用させ、Superose 6を用いたゲル濾過にてコア蛋白質を精製した。このコア蛋白質にはxyl-gal-gal-DELTAUAという4糖から成るlinkage reginが切り株として残存しており、この部分の正確を調べるためにbeta-eliminationにより、コア蛋白質からlinkage regionを切り離しTSK 2500PWカラムによるゲル濾過の後、YMC NH_2カラムで解析したところ、これらの一部(おそらくgalactose)が硫酸化していることが判明した。目的とする抗原を得るにはこの硫酸基を除く必要があり様々な検討を加えた結果、chondro 4-sulfataseによって硫酸基を除去できることが分かった。さらに酢酸水銀を作用させる事によって、このlinkage regionからDELTAUAも除去できることができ現在はxyl-gal-galという切り株を持つコア蛋白が精製できている。さらにbeta-galactosidaseによってこのgalactoseの除去を現在試みているところである。HPLC解析の条件設定にかなり時間がかかったため現在まだ抗原精製の段階であるが、すでにその最終段階に入っており、終了し次第直ちに抗体作製の仕事にとりかかる予定である。

8月，当糖基化的HPLC柱到达时，我们开始纯化抗原以生产单克隆抗体。引言，蛋白聚糖分子是通过CSCL的密度梯度离心从蜂群大鼠软骨肉瘤中纯化的，其次是软骨蛋白酶ACII和蛋白酶抑制剂在蛋白聚糖分子上，核心核心的核心蛋白质蛋白质和核心蛋白质通过凝胶滤光度使用超级蛋白质的链条进行了6。该核心蛋白质中的树桩。为了检查该部分的准确性，通过β-脱离了核心蛋白，使用TSK 2500PW柱将连锁区域与核心蛋白分开，发现该分析在YMC NH_2柱上，该柱显示了其中一些（可能是半乳糖）被硫化。为了获得所需的抗原，必须去除硫酸盐基团，并进行了各种研究，并且发现Chondro 4-硫酸酯酶可以去除硫酸盐基团。此外，通过作用乙酸汞，也可以从该连接区域中去除三角洲，并且现已纯化了带有称为xyl-gal-gal的树桩的核心蛋白质。此外，我们目前正在尝试使用β-半乳糖苷酶去除该半乳糖。为HPLC分析设置条件花了很多时间，因此抗原纯化阶段仍处于抗原纯化的阶段，但是它已经进入了最后阶段，我们计划一完成后就开始从事抗体生产。