石灰化に伴う各種プロテオグリカンの構造変化に関する生化学的、組織化学的解析

与钙化相关的各种蛋白聚糖结构变化的生化和组织化学分析

基本信息

批准号：
06671806
负责人：
柴田俊一
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671806/
关键词：
プロテオグリカン石灰化軟骨歯髄細胞

项目摘要

1、in vitroにおける石灰化の系としてSwarm Rat軟骨肉腫と歯髄細胞の系を用いて組織化学的な検索を行ったところ、軟骨肉腫の系では石灰化に伴なってtoluidinc blueによるメタクロマジアやalcian blue染色性の低下が認められプロテオグリカンの分解が示唆されたのに対し、歯髄細胞の系ではむしろalcian blue染色性が増加する傾向を示した。このことから各組織に含まれるプロテオグリカンの種類によって石灰化への役割が異なっているのではないかと考えられた。2、購入した示唆屈折率モニタを用いて軟骨肉腫より精製したアグリカンのlinkage region(xyl-gal-gal-ΔglcUAという4糖)について解析した。その結果従来知られているin vitroでのものと異なり、xyloseはほとんどリン酸化していないことが判明し、また一部のgalactoseが硫酸化している可能性が示唆された。この構造が石灰化と関係があるかどうかはまだ不明であるが、1の問題とともに、本年度は残念ながら間に合わなかったが、アイソトープで標識し、詳しい構造解析をすることによって明らかになると考えられる。3、アグリカンのコア蛋白質を抗原としてモノクロナール抗体の作成を試みた。その結果コア蛋白質のなかにエピトープがあると考えられる抗体が得られた。現在石灰化軟骨組織におけるこの抗体の反応性について検討中である。4、軟骨内骨化が進行する際、基質の石灰化にともなって肥大軟骨細胞が死滅する過程は生物学的細胞死(アポトーシス)であると言われている。この現象は石灰化機構を究明するためにたいへん重要であると考え、アポトーシス検索キットを購入し検索した。その結果、肥大軟骨細胞はこのキットでは反応せず別の機構も考えられたが、歯の萌出時の退縮エナメル芽細胞にその反応が認められ、その所見をもとにして論文を作成し7月ころ出版の予定である。

1。使用群大鼠软骨肉瘤和纸浆细胞系统作为体外钙化系统进行组织化学搜索。在软骨肉瘤系统中，通过钙化观察到了由于甲状腺蓝蓝色引起的化角粒细胞和阿尔西安蓝色染色能力的降低，这表明蛋白聚糖的降解，而在牙髓细胞系统中，阿尔西安蓝色呈增加的趋势。这表明钙化的作用取决于每个组织中包含的蛋白聚糖的类型。 2。分析了使用购买的暗示性折射率监测仪从软骨肉瘤中纯化的Aggrecans的连锁区域（称为Xyl-Gal-Gal-Gal-ΔGlcua）。结果表明，与常规的体外已知，木糖几乎被磷酸化，并提出可能将某些半乳糖硫糖硫酸化。该结构是否与钙化有关，但由于问题1是否与钙化有关，但不幸的是，今年没有及时，但是人们认为，通过标记同位素并进行详细的结构分析，这将变得清楚。 3。我们尝试使用Aggrecan的核心蛋白作为抗原来创建单克隆抗体。结果，被认为在核心蛋白中具有表位的抗体。目前，正在研究该抗体在钙化软骨组织中的反应性。 4。随着内软骨骨化的发展，随着底物钙化的发生，肥厚的软骨细胞死亡的过程是生物细胞死亡（凋亡）。我认为这种现象对于研究钙化机制非常重要，因此我购买了一个凋亡搜索套件并进行了搜索。结果，肥厚的软骨细胞对该套件没有反应，并且考虑了不同的机制，但是在牙齿喷发时在回归搪瓷爆炸中观察到了反应，并且根据这些发现，准备了一份论文并计划在7月左右发表。