骨・軟骨両者の分化可能な骨髄器官培養系の確立とその分化過程の細胞生物学的解析

能够分化骨和软骨的骨髓器官培养体系的建立及其分化过程的细胞生物学分析

• 批准号: 05771794
• 负责人: 里村 一人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771794/
• 关键词: 骨髄; 骨髄間質細胞; コラーゲンゲル; 骨形成; 軟骨形成; 石灰化

F344系ラット(3週齢、雄)の大腿骨および脛骨より可及的無菌下に摘出した骨髄組織を骨髄本来の組織構築を維持したままタイプIコラーゲンゲル内に包埋し、培養を行った。培養液は、10%牛胎仔血清、50mug/mlL-アスコルビン酸、60mug/mlカナマイシンを含むalpha-MEMを用いた。培養下における骨髄組織の経時的変化を観察するため、培養開始直後、培養1、3、5、7、10、14、21、28日目に骨髄組織を周囲のコラーゲンゲルを含めて10%中性緩衝ホルマリンにて固定し、エタノール系列にて脱水、ハイドロキシエチルメタクリレート樹脂に包埋し、4℃で重合させた。続いて厚さ3mumの組織切片を作製し、ヘマトキシリン-エオジン染色、トルイジンブルー染色(pH4)を行った。さらにカルシウムを検出するためにアリザリンレッドS染色、リン酸カルシウムを検出するためにvon Kossa染色、アルカリ性ホスファターゼ活性を検出するためにナフトールAS-BIリン酸を基質としたアゾ色素法による染色を行った。この結果、培養7日目よりコラーゲンゲル内に線維芽細胞様細胞の増殖がみられ、これらの細胞はアルカリ性ホスファターゼ活性を有していた。さらに培養28日目では一部石灰化が認められた。また本培養系にさらに5mMbeta-グリセロリン酸を添加し同様の実験を行ったが、明らかな石灰化促進は認められなかった。この石灰化物につき現在引き続き電子顕微鏡レベルでの確認を行っており、今後さらにx線微小分析、電子線回折等を行う予定である。本研究により、骨髄間質細胞はコラーゲンゲル内においても骨原性細胞に分化し得ることが示唆されたが、骨あるいは軟骨の組織構築を実現するためにはさらに適切な培養条件等の設定が必要と考えられた。

F344 is a 3-week-old male thigh bone and tibia tissue that can be aseptically extracted and maintained in the tissue structure of the bone. The culture medium was mixed with 10% fetal bovine serum, 50 ug/ml L-alphavirin acid, 60 ug/ml L-alphavirin or alpha-MEM. The changes of bone marrow tissue during culture were observed at 1, 3, 5, 7, 10, 14, 21 and 28 days after culture. The bone marrow tissue was fixed with 10% neutral buffer, dehydrated, embedded in resin at 4℃. Tissue sections were prepared at a thickness of 3mum and stained at pH4. For example, if you want to use the AS-BI staining method, you can use the AS-BI staining method. The results showed that 7 days after culture, the growth of cells in vitro was increased, and the activity of cells in vitro was increased. The 28-day culture period was a period of lime production. The culture system was developed by adding 5 mM beta-glucuronic acid to the culture medium, and the liming process was promoted by the liming process. This lime compound is now introduced into the electronic microscope to confirm the operation, and in the future, x-ray microanalysis, electronic line folding, etc. are scheduled. In the present study, it is necessary to establish proper culture conditions for osteogenic cells in vitro.