大腸菌の挿入因子IS1及びIS3の転移機構に関する研究

大肠杆菌插入因子IS1和IS3易位机制研究

• 批准号: 05780497
• 负责人: 関根 靖彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780497/
• 关键词: 挿入因子; IS1; IS3; トランスポゾン; トランスポゼ-ス; 転移

本研究は、大腸菌の代表的な挿入因子IS1とIS3に関して、その転移機構を解明する目的とした解析を行ない、以下のことが明らかになった。1.IS1の逆向き反復配列(IR)の解析:IS1のIRの機能の解析を進める為に、まずIS1の転移頻度を測定できるアッセイ系を構築した。即ち、IS1のIRを両端に持ちその間に薬剤耐性マーカーを挟んだ転移のユニット(ミニIS1)と、IPTGにより誘導可能なプロモーターにより発現が調節できるようにしたトランスポゼ-ス遺伝子とを持つプラスミドを作製し、このミニIS1が別の標的プラスミドへ転移する頻度をミニIS1に由来する薬剤耐性のコロニー数から測定するというものである。実際に、添加するIPTGに依存してIS1の転移がおこることが確かめられた。今後は、このアッセイ系を用いて、ミニIS1のIRに部位特異的変異を導入し、それがIS1の転移に与える効果を調べる予定である。2.IS3の転移機構の解析:(1)トランスポゼ-スが恒常的に産生されるような変異体IS3を持つプラスミドから生じる、転移中間体と考えられる直鎖状IS3分子を単離しその構造を詳細に解析した。その結果、直鎖状IS3分子は両末端にIS3の配列とは異なる5突出した3塩基の配列を有すること、その塩基配列はプラスミド上でIS3に隣接する配列と同じであることがわかった。このことは、直鎖状IS3分子がプラスミドから直接切り出されて生じたことを示し、この分子が転移の中間体である可能性を強く支持する。(2)IS3に関しても、1で述べたIS1の場合と同様のプラスミドを構築した。このプラスミドを保持する大腸菌において、IPTGの添加に依存して、ミニIS3による欠失反応やミニIS3の切り出し、環状化などの現象が観察された。(3)OrfA,OrfB蛋白質を誘導産生するプラスミドを構築した。このプラスミドを2-(2)で述べたプラスミドと共存させ、OrfA,OrfBの誘導がトランスポゼ-スにより誘起される現象に与える効果を現在調べている。(4)ファージT7のプロモーターを利用し、トランスポゼ-ス及びOrfA蛋白質の過剰生産に成功した。現在、各蛋白質の精製の他、in vivoでみられた現象が各蛋白質を含む粗抽出液の添加によりin vitroで再現できるかどうかを試みている。

In this study, the input factors represented by IS1, IS3, and transfer mechanism explain the purpose of this study to analyze the data, and the following information is available. 1.IS1 reverse reverse collocation (IR) analysis: the IS1 IR machine can analyze the performance of the system, and determine the accuracy of the system. That is, the end of the IS1 IR device shows that there is a problem of tolerance and tolerance, that is, it is possible that the IPTG device may cause a change in the performance of the device, and that the IPTG device may cause a change in the performance of the device. This is the reason why you need to know how to move your IS1. The reason for your IS1 is to measure your patience and count. International, add "IPTG" dependencies "IS1" move "please" make sure that you do not need to hear about it. In the future, the following information will be used, the special parts of the IS1 IR will be affected, the IS1 will be moved and the results will be predetermined. The analysis of the 2.IS3 transfer mechanism: (1) the IS3 device is used to analyze the structure of the IS3 molecule that is in the shape of a straight-line molecule. The results show that the end of the straight-shaped IS3 molecule has an IS3 configuration, which highlights the base configuration of the third base, and the IS3 configuration on the base of the alignment is similar to that of the other two. The IS3 molecules in the shape of straight and straight lines are cut directly to show that there is a strong support for the possibility of body in the molecule. (2) IS3, IS1, and so on, together with each other in the same way. We need to maintain the following information: bacteria, IPTG, dependency, IS3, IS3, and environmental protection. (3) the expression of OrfA,OrfB protein induces the production of antigens. Please tell us that there is a problem of co-existence, and that the OrfA,OrfB command is responsible for the occurrence of the disease. (4) the utilization of T7 protein and OrfA protein were detected successfully. Now, the protein extract, the in vivo extract, the protein extract, the crude extract, the in vitro, the protein, the protein and the protein.

项目成果

Y.Sekine: "Translational control in production of transposase and in transposition of insertion sequence IS3" Journal of Molecular Biology. 235. 1406-1420 (1994)

Y.Sekine：“转座酶产生和插入序列 IS3 转座中的翻译控制”分子生物学杂志。