大腸菌の挿入因子ISの転移とその制御の分子機構

大肠杆菌插入因子IS易位的分子机制及其调控

基本信息

  • 批准号:
    11780488
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.IS3トランスポゼースによる融合体形成反応の解析:IS3トランスポゼースにより形成される、IS3を運ぶプラスミド(ドナー)と標的プラスミドの融合体の構造解析の結果、融合体はドナーと標的の境界部分を含む領域を欠失していることがわかった。一方、IS3の内部を大きく欠失させたミニIS3を運ぶドナーを用いた場合、生じたすべての融合体は欠失を持たなかった。以上の結果はIS3の内部配列に融合体形成時のDNA複製を阻害する配列が存在することを示唆する。2.IS3トランスポゼースの精製とそれを用いた転移反応の素過程の解析:IS3トランスポゼースをマルトース結合タンパク質との融合タンパク質の形で精製した。得られたトランスポゼースをIS3を運ぶプラスミドに作用させたところ、ISの一方のDNA端がもう一方の端につなぎ換わる反応がおこった。一方、トランスポゼースを環状IS3を運ぶプラスミドに作用させたところ、IS末端でのDNA鎖の切断が起こることがわかった。以上の結果はIS3の転移反応の素過程がIS3トランスポゼースのみでin vitroで再現できたことを示す。3.IS1の転移に必須な宿主因子H-NSの解析:(1)ゲルシフト法により、H-NSはIS1の配列に特異的には結合しないことがわかった。(2)H-NSの各ドメインに変異をもつhns遺伝子の存在下でIS1の転移能を調べた結果、IS1の転移にはH-NSのDNA結合ドメインは不要で、ダイマー形成ドメインが必要であることがわかった。これらの結果から、H-NSはIS1のDNAに直接結合するのではなく、恐らくトランスポゼースと相互作用することによってIS1の転移を起こさせると考えられる。
The reverse analysis of the fusion is caused by the formation of the fusion body in the 1.IS3 system. The analysis shows that the fusion body is formed in the IS3 system, and that the fusion body in the IS3 system is analyzed. The realm part of the fusion body contains the missing domain. On the one hand, the IS3 internal system is in short supply, and the IS3 system is in short supply. The above results show that when the fusion of IS3 internal configuration is formed, there is an instigation of DNA replication to block the configuration of DNA. The process analysis of 2.IS3 is based on the analysis of the process of anti-antiserotin. in this way, IS3 is used to analyze the whole process: IS3 is used to analyze the process of fusion. You have to tell me that you have an IS3 problem, that is, the DNA side of the IS side, the side of the DNA side, the side of the side. On the other hand, the party is responsible for the environmental IS3 pollution, and the end of the IS is cut off by the DNA. The above results show that the IS3 transfer is not a factor process. The IS3 response does not affect in vitro. The symptoms show up again. 3.IS1 transfer must be based on the host factor H-NS analysis: (1) the combination of the special features of the H-NS IS1 system and the host factor must be parsed in combination with each other. (2) in the presence of H-NS data, the results of IS1 transfer can be analyzed, and the results of IS1 transfer can be obtained by combining the H-NS data with the DNA data. The results show that the H-NS IS1 DNA directly combines the data from the computer, and is afraid that the interaction will be affected by the interaction between the two groups.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Shiga,Y.: "Involvement of H-NS in transpositional recombination mediates by ISi"J,Bacteriol. 183(印刷中). (2001)
Shiga,Y.:“H-NS 参与 ISi 介导的转座重组”J,Bacteriol 183(出版中)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Shiga,Y.: "Transposition of IS1 circles."Genes Cells. 4. 551-561 (1999)
Shiga,Y.:“IS1 环的转位。”基因细胞。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Sekine,Y.: "Linearization and transposition of circular molecules of insertion sequence IS3."J.Mol.Biol.. 294. 21-34 (1999)
Sekine,Y.:“插入序列 IS3 的环状分子的线性化和转座。”J.Mol.Biol.. 294. 21-34 (1999)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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