卵成熟誘起におけるホルモンの作用機構に関する分子生物学的研究:卵成熟誘起ホルモン(MIH)による卵成熟促進因子(MPF)活性化の分子メカニズム

激素诱导卵母细胞成熟作用机制的分子生物学研究：卵母细胞成熟诱导激素（MIH）激活卵母细胞成熟促进因子（MPF）的分子机制

• 批准号: 05740501
• 负责人: 平井 俊朗
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Teikyo University of Science & Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05740501/
• 关键词: 卵成熟誘起ホルモン(MIH); 卵成熟促進因子(MPF); 卵成熟; cdk2キナーゼ; プロテインキナーゼ; cDNA

ホルモンによる卵成熟キナーゼカスケード活性化機構の解明を目指し、その構成分子の分子生物学的単離、同定を試み、以下の成果を得た。キンギョ未成熟卵を卵成熟誘起ホルモン:17alpha,20beta-ジヒドロキシ-4-プレグネン-3-オン存在下で培養し、経時的に回収した卵細胞質よりcdk2キナーゼを免疫沈降してヒストンH1キナーゼ活性を測定したところ、cdk2活性は減数第一分裂中期頃より上昇し始め、減数第二分裂中期に最高値に達したが活性はcdc2キナーゼの1/10程度であった。一方cdc2とは異なり、間期と成熟卵賦活後における不活性化は見られなかった。また、卵成熟過程においてcdk2タンパク質ならびにmRNA量に顕著な変動は見られなかった。キンギョ成熟卵cDNAライブラリーよりプロテインキナーゼの共通領域をコードする合成オリゴヌクレオチドをプローブとしてスクリーニングを行い、4種6個のクローンを単離し、塩基配列を決定した(以下GFKINと呼ぶ)。推定されるアミノ酸配列に対する相同配列をデータベースで検索したところ、既知のものはなかったが体細胞分裂関連キナーゼのいくつかと低い相同性が見出された。特にGFKIN5と12は出芽酵母S.cerevisiaeのKIN3キナーゼおよびA.nidulansのNIMAキナーゼに、またGFKIN7と9はMAPキナーゼファミリーにそれぞれ30〜40%の相同性を持っていた。また、ノーザンブロット分析で当該遺伝子の発現が生殖腺でのみ検出されたことからこれらのキナーゼが卵成熟過程に何らかの機能を果たしているものと推測された。これらのcDNAに対する大腸菌組換えタンパク質を作製し、マウスに免疫したがcDNA産物を認識する抗体は今のところ得られておらず、現在複数の異なるタンパク質発現系を用いて再試行している。

ホ ル モ ン に よ る eggs mature キ ナ ー ゼ カ ス ケ ー ド activeness institutions の interpret を refers し, そ の constitute molecules の 単 from molecular biology, try to settle を み, the following の achievements を た. キ ン ギ を ョ immature eggs eggs mature induced ホ ル モ ン : 17 alpha and beta - 20 ジ ヒ ド ロ キ シ - 4 - プ レ グ ネ ン - 3 - オ ン で し, in the presence of 経 に back when 収 し た egg mass よ り cdk2 キ ナ ー ゼ を immune sink し て ヒ ス ト ン H1 キ ナ ー を ゼ activity determination し た と こ ろ, cdk2 activity は reduction Mid first division recollected よ り rise し め, reduction the second division on medium-term に highest numerical に da し た が active は cdc2 キ ナ ー ゼ の 1/10 degree で あ っ た. One party 's cdc2と is different from な, and における is inactivated における after activation of the と mature egg in the interphase. See られな った った. ま た, egg maturation に お い て cdk2 タ ン パ ク qualitative な ら び に amount of mRNA に 顕 the な - move は see ら れ な か っ た. キ ン ギ ョ mature eggs cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ の common areas を コ ー ド す る synthetic オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を プ ロ ー ブ と し て ス ク リ ー ニ ン グ を い, four kinds of six の ク ロ ー ン を 単 from し, salt base with column を decided し た (hereinafter GFKIN と shout ぶ). Presumption さ れ る ア ミ ノ acid with column に す seaborne る with same column を デ ー タ ベ ー ス で 検 cable し た と こ ろ, both known の も の は な か っ た が somatic cell division masato even キ ナ ー ゼ の い く つ か と low い phase out gay が さ れ た. Trevor に GFKIN5 と 12 は budding yeast S.c erevisiae の KIN3 キ ナ ー ゼ お よ び A.n idulans の NIMA キ ナ ー ゼ に, ま た GFKIN7 と 9 は MAP キ ナ ー ゼ フ ァ ミ リ ー に そ れ ぞ れ 30 ~ 40% の identity を hold っ て い た. ま た, ノ ー ザ ン ブ ロ ッ で ト analysis when the posthumous son 伝 の 発 now が gonad で の み 検 out さ れ た こ と か ら こ れ ら の キ ナ ー ゼ が egg maturation に what ら か の function を fruit た し て い る も の と speculation さ れ た. こ れ ら の cDNA に す seaborne る coliform group in え タ ン パ ク し, the qualitative を cropping マ ウ ス に immune し た が cDNA product を know す る antibody は today の と こ ろ have ら れ て お ら ず, now a plural の different な る タ ン パ ク qualitative 発 department を now use い て trial again し て い る.