魚類卵成熟におけるMPF形成初期過程の分子機構

鱼卵成熟过程中MPF形成初始过程的分子机制

基本信息

批准号：
06680712
负责人：
山下正兼
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

キンギョ卵成熟過程における卵成熟促進因子(MPF)の活性化機構を探るため、以下の2点について調べた。1.卵成熟過程でのサイクリンB合成開始の機構キンギョ卵成熟誘起において、サイクリンBの翻訳開始はMPFの活性化と直接関わる。本研究ではサイクリンBの翻訳開始と、サイクリンBmRNAのポリA鎖伸長との関係を調べた。アダプター/dTプライマーによるPCR法で、ポリA鎖の長さの卵成熟過程での変化を調べたところ、サイクリンBの合成が始まる時期にそのmRNAのポリA鎖が著しく伸長することを発見した。このことはサイクリンBmRNAのポリA鎖伸長が、サイクリンB翻訳開始と関係することを示唆する。2.cdc2活性化スレオニンリン酸化酵素の同定MPFの本体であるcdc2は、サイクリンBとの結合後に、cdc2活性化酵素により161番目のスレオニン(T161)がリン酸化され、活性化する。このcdc2を活性化する酵素として、MO15遺伝子産物に注目し、その機能の解明を行った。キンギョMO15cDNAを大腸菌で発現させ、抗体を作製した。キンギョ未成熟卵抽出液には不活性型cdc2は存在するが、サイクリンBはない。これに大腸菌で作製したサイクリンBを入れると、cdc2のT161がリン酸化され、活性化した。この時、あらかじめ抗体でMO15を抽出液から除いておくと、サイクリンBを入れても、cdc2は活性化しなかった。これにウサギ網状赤血球ライセ-トで作製したMO15を加えると、cdc2の活性化が回復した。このことはMO15がcdc2活性化酵素であることを強く示唆する。

为了探索在骨髓卵成熟过程中卵成熟启动子（MPF）激活的机理，研究了以下两个点。 1。在鸡蛋成熟期间，在腌制鸡蛋诱导过程中，细胞周期蛋白B合成的机理，细胞周期蛋白B的转化起始与MPF的激活直接相关。在这项研究中，我们研究了细胞周期蛋白B翻译的启动与细胞周期蛋白B mRNA的polya链扩展之间的关系。当我们使用适配器/DT引物在卵成熟过程中调查鸡蛋成熟过程中Polya链长度的变化时，我们发现在Cyclin B合成开始时，mRNA的Polya链大大扩展。这表明细胞周期蛋白B mRNA的polya链扩展与细胞周期蛋白B翻译起始有关。 2。MPF的主体鉴定Cdc2激活的苏氨酸磷酸化酶CDC2在与Cyclin b结合后，通过CDC2激活酶在161苏氨酸（T161）上磷酸化，并通过CDC2激活酶进行磷酸化。我们专注于Mo15基因产物作为一种激活该CDC2并阐明其功能的酶。在大肠杆菌中表达棉花糖MO15 cDNA以产生抗体。 Cdc2的非活性形式存在于未成熟金鱼卵的提取物中，但是没有细胞周期蛋白B。当将大肠杆菌中的细胞周期蛋白B添加到此中时，Cdc2中的T161磷酸化并激活。目前，使用抗体提前从提取物中除去MO15，即使添加了细胞周期蛋白B，也不会激活CDC2。添加由兔网状细胞许可产生的MO15恢复了CDC2的激活。这强烈表明MO15是Cdc2激活酶。