魚類卵成熟におけるMPF形成初期過程の分子機構

鱼卵成熟过程中MPF形成初始过程的分子机制

• 批准号: 06680712
• 负责人: 山下 正兼
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680712/
• 关键词: 卵成熟; 卵成熟促進因子(MPF); cdc2; サイクリンB; MO15; キンギョ; 蛋白質翻訳開始; 蛋白質リン酸化酵素

キンギョ卵成熟過程における卵成熟促進因子(MPF)の活性化機構を探るため、以下の2点について調べた。1.卵成熟過程でのサイクリンB合成開始の機構キンギョ卵成熟誘起において、サイクリンBの翻訳開始はMPFの活性化と直接関わる。本研究ではサイクリンBの翻訳開始と、サイクリンBmRNAのポリA鎖伸長との関係を調べた。アダプター/dTプライマーによるPCR法で、ポリA鎖の長さの卵成熟過程での変化を調べたところ、サイクリンBの合成が始まる時期にそのmRNAのポリA鎖が著しく伸長することを発見した。このことはサイクリンBmRNAのポリA鎖伸長が、サイクリンB翻訳開始と関係することを示唆する。2.cdc2活性化スレオニンリン酸化酵素の同定MPFの本体であるcdc2は、サイクリンBとの結合後に、cdc2活性化酵素により161番目のスレオニン(T161)がリン酸化され、活性化する。このcdc2を活性化する酵素として、MO15遺伝子産物に注目し、その機能の解明を行った。キンギョMO15cDNAを大腸菌で発現させ、抗体を作製した。キンギョ未成熟卵抽出液には不活性型cdc2は存在するが、サイクリンBはない。これに大腸菌で作製したサイクリンBを入れると、cdc2のT161がリン酸化され、活性化した。この時、あらかじめ抗体でMO15を抽出液から除いておくと、サイクリンBを入れても、cdc2は活性化しなかった。これにウサギ網状赤血球ライセ-トで作製したMO15を加えると、cdc2の活性化が回復した。このことはMO15がcdc2活性化酵素であることを強く示唆する。

The activation mechanism of egg maturation promoting factor (MPF) during egg maturation was explored. The following two points were discussed. 1. The mechanism of initiation of protein B synthesis during egg maturation is directly related to the initiation of protein B synthesis and the activation of MPF. In this study, we investigated the relationship between the initiation of transcription and the elongation of transcription. PCR method is used to detect the expression of mRNA in the early stages of egg maturation. This is the first time that A person has ever been involved in a relationship with a person. 2. cdc2-activating enzyme is activated by the enzyme (T161) after binding with cdc2-activating enzyme (T161). The activation of cdc2 and the elucidation of its function by MO15 gene products have been highlighted. MO15 cDNA was produced in E. coli and antibody was produced in E. coli. Inactive cdc2 is present in immature egg extract. Here, coliform bacteria are added to the system, and cdc2 and T161 are acidified and activated. When the time comes, the antibody is MO15. The extract is removed. The cdc2 is activated. The activation of CDC2 and MO15 was also investigated. MO15-cdc2 activating enzyme

项目成果

Masakane Yamashita: "Molecular mechanisms of the activation of maturation-promoting factor during goldfish oocyte maturation." Developmental Biology. 168(印刷中). (1995)

Masakane Yamashita：“金鱼卵母细胞成熟过程中成熟促进因子激活的分子机制”，《发育生物学》（1995 年）。