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骨格筋弾性タンパク質コネクチンのクローニングと巨大タンパク質発現系の検討

骨骼肌弹性蛋白连接蛋白的克隆及巨蛋白表达系统的研究

基本信息

批准号：
05740513
负责人：
丸山敬
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

骨格筋の収縮はアクチンとミオシンの相互作用によるが、弛緩時には、構造蛋白質の一種である弾性蛋白質が重要である。これらの蛋白質の弾性により筋肉は、円滑に収縮と弛緩を行なうことができる。この蛋白質の代表が、筋肉の縦方向に走行する分子量300万を越える巨大なコネクチンである。このような巨大蛋白質のアミノ酸配列、遺伝子構造、生合成の過程は、通常の分子量20万以下の蛋白質とは異なる可能性があり、そのクローニングを試みた。特異的抗体によりニワトリのコネクチンのcDNAのクローニングを試みた。その結果、3kbのpCN1と4kbのpCN3が得られた。どちらのクローンも、そのmRNAは非常に巨大であることがノーザンブロッティングで確認できた。pCN3は全長にわたるアミノ酸フレームが存在し、約1300個のアミノ酸をコードしていると考えられた。細菌でその一部を発現させ、ウサギで特異的抗体を作成した。その抗体は、ウエスタンブロッティングにてコネクチンを認識し、筋原線維のI帯の中間のN2ライン付近を染色した。また、pCN1は、配列から3末端側のクローンと考えられ、約800個のアミノ酸配列が推定された。合成ペプチドに対する抗体は、やはりブロッティングにてコネクチンを認識し、筋原線維のM線を染色した。以上結果から、このこれらのクローンはコネクチンのクローンであることが明かになった。現在報告されているウサギ・コネクチン、ヒト心筋コネクチンなどの部分配列と比較すると、類似性は高いものの、相違点も見いだされた。今後はこの違いの意味について検討していきたい。さらに、巨大タンパク質のC末端とN末側のそれぞれにに特異的な抗体が得られたので、巨大ペプチドの合成速度の測定を次の課題としたい。

The interaction between the contraction and relaxation of bone tendons is important as a kind of structural protein. The protein content of the protein is very high. The protein represents the direction of muscle movement. The molecular weight is 3 million. The protein represents the direction of muscle movement. The protein structure, acid sequence, biosynthesis process, and the possibility of variation of proteins with molecular weights of less than 200,000 are examined. A special antibody was developed to detect the presence of a cDNA fragment. 3kb pCN1 and 4 kb pCN3 were obtained. The expression of mRNA is very large. pCN3 has about 1300 amino acids in its total length. A part of the bacteria was discovered and specific antibodies were produced. The antibody was found to be sensitive to the presence of N2 in the middle of the I band. About 800 pairs of pCN1 and pCN2 were estimated to be aligned at the end of each pair. The antibody is synthesized and stained with M-ray. The above results show that there is no such thing as a " We now report that there are some differences between the two groups, such as similarity, similarity and contradiction. In the future, the violation will mean that the investigation will be carried out in the middle of the investigation. In addition, the C-terminal and N-terminal sides of the giant protein were detected by specific antibodies.