標識プロテアーゼインヒビターによる活性型プロテアーゼ定量法の開発

开发使用标记蛋白酶抑制剂定量活性蛋白酶的方法

• 批准号: 05857276
• 负责人: 木戸 隆宏
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857276/
• 关键词: リカドウェスタンブロッティング; セリンプロテアーゼ; トリプシンインヒビター; トリプシン; プラスミン; ビオチン; アビジン; 化学発光

1.プロテアーゼインヒビターの非RI標識NHS-ビスチンによって、大豆由来トリプシンインヒビターは、約90%程度ビスチン化された。また、トロプシンインヒビターのセリンプロテアーゼに対する阻害活性は、ビオチン化によってほとんど影響されなかった。2.セリンプロテアーゼの特異的検出ビスチン化トリプシンインヒビターをリガンドとして、膜にブロットされたプロテアーゼを検出した結果、セリンプロテアーゼであるトリプシン、プラスミンは検出されたが、酸性型、チオール型、金属型プロテアーゼは全く反応しなかった。また、前駆体であるトリプシノーゲン、プラスミノーゲンも検出されなかった。3.検出感度プラスミンは、アビジン-ペルオキシダーゼによる発色反応で少なくとも約4ngまで検出することが出来た。ルミノール化学発光反応を用いることによって、検出感度を発色反応より約10倍高めることが出来た。4.生体成分のセリンプロテアーゼの検出健常人血清中で活性型セリンプロテアーゼは検出されなかったが、ストレプトキナセ-ゼ処理の結果、プラスミンを特異的に検出することが出来た。

1. Non-RI identification of soybean origin and non-RI identification of soybean origin and non-RI identification of soybean origin The first step is to reduce the risk of damage to the environment and the second step is to reduce the risk of damage. 2. The special detection results of the film and the special detection results of the film and the special detection results of the acid type, the metal type and the metal type are completely reversed. The first part of the article is about how to use the word "free" to describe the situation. 3. The sensitivity of the detection is reduced by about 4 ng. The sensitivity of the light emission is about 10 times higher than that of the light emission. 4. The results of the treatment of biological components in healthy human serum show that the active type of biological components can be detected in a specific way.

项目成果

Kido,T.: "Ligand Western blotting for specific detection of activeforms of proteases" Clirica Chimica Acta. (in press).

Kido,T.：“用于特异性检测蛋白酶活性形式的配体蛋白质印迹”Clirica Chimica Acta。