キャピラリー電気泳動法によるMRSAにおけるmec領域遺伝子の迅速分析法の開発

毛细管电泳快速分析MRSA mec区基因的方法的开发

• 批准号: 06857186
• 负责人: 木戸 隆宏
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857186/
• 关键词: キャピラリー電気泳動; 黄色ブドウ球菌; メチシリン耐性; ポリメラーゼチェインリアクション

1.キャピラリー電気泳動法の泳動条件の検討アクリルアミドゲルのキャピラリーカラム(100μm×30cm:ベックマン製)を用いて分解能を検討した結果、200塩基から600塩基の範囲では、塩基長の数%の違いで分離できることが明らかとなった。サンプル注入から検出までの時間(検出目的物のゲル内移動時間)は40分以内と極めて迅速であった。また、その再現性も同時再現性、日差再現性とも5%以内と良好なものであった。2.検出感度紫外部吸収による測定(260nm)での検出限界は、10μg/μl程度であり、PCR増幅産物の検出には充分なものであった。しかし、検体の微量化を進めるためには、もう一桁以上感度を上げる必要があると考えられ、検出系を蛍光に変えるなどの検討が必要である。3.黄色ブドウ球菌からのDNA抽出細菌の細胞壁溶解酵素を含む溶菌条件を検討した結果、実施したほとんどすべての菌株からDNAを抽出することが可能であったが、100余例中5例極めて溶菌しにくい株が認められた。溶菌条件についてはより検討が必要である。今年度得られた成果をふまえて、マルチプライマーによるPCRによって複数の目的遺伝子領域を増幅し、キャピラリー電気泳動によって一度に検出することによって迅速検出を可能にすることができると考えられる。

1. The キ ャ ピ ラ リ ー 気 swimming method の swimming conditions の beg ア 検 ク リ ル ア ミ ド ゲ ル の キ ャ ピ ラ リ ー カ ラ ム (100 mu m * 30 cm: ベ ッ ク マ ン) を with い て can decompose を beg し 検 た results, 200 salt base か ら 600 salt base の van 囲 で は, salt base length の % の violations い で separation で き る こ と が Ming ら か と な っ た. サ ン プ ル injection か ら 検 out ま で の time (検 out purpose の ゲ ル mobile time) は 40 points と extremely め て quickly で あ っ た. Youdaoplaceholder0, そ <s:1> reproducibility <e:1> simultaneous reproducibility and daily variation reproducibility と また within 5% と good な であった であった であった. 2. 検 sensitivity violet external suction 収 に よ る determination (260 nm) で の 検 out limit は, degree of 10 mu g/mu l で あ り, PCR product rights of の 検 out に は fully な も の で あ っ た. し か し, 検 の trace amount を into め る た め に は, も う sensitivity in more than one girder on を げ る necessary が あ る と exam え ら れ, 検 out を 蛍 light に - え る な ど の beg が 検 necessary で あ る. 3. Yellow ブ ド ウ aureus か ら の DNA extraction cell walls of bacteria の lysozyme を containing む lysis conditions を beg し 検 た results, be し た ほ と ん ど す べ て の strains か ら DNA を spare す る こ と が may で あ っ た が, more than 100 cases, 5 cases were extremely め て lysis し に く い strains が recognize め ら れ た. The conditions for bacterial dissolution are に, に, て, よ, <e:1>, 検 and が. This year have ら れ た results を ふ ま え て, マ ル チ プ ラ イ マ ー に よ る PCR に よ っ て plural の purpose heritage 伝 sub-fields を raised し, キ ャ ピ ラ リ ー electric 気 swimming に よ っ て once に 検 out す る こ と に よ っ て 検 quickly out of the を may に す る こ と が で き る と exam え ら れ る.

项目成果

T.KIDO: "Ligand Westem blotting for specific detection of active form of protease" Clinca Chimica Acta. (in press).

T.KIDO：“用于特异性检测蛋白酶活性形式的配体蛋白质印迹”Clinca Chimica Acta。

橋本誠司: "Intercalation Monitoring PCRによるmecA遺伝子の迅速検出" 臨床病理. 42. 279 (1994)

Seiji Hashimoto：“通过插层监测 PCR 快速检测 mecA 基因”《临床病理学》42. 279 (1994)。