权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

脂質平面膜法を用いた骨格筋筋小胞体イオンチャンネルの精製及び構造解析

脂质平面膜法纯化骨骼肌内质网离子通道并进行结构分析

基本信息

批准号：
05858092
负责人：
井出徹
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05858092/
关键词：
脂質平面膜法筋小胞体イオンチャンネル

项目摘要

我々は、脂質平面膜法を検定系として、筋小胞体チャネルの精製を試みてきたが、ConA-Sepharose及び陰イオン交換クロマトグラフィーによる分離した分子量が138kDaと100kDaの糖タンパクを含む分画にのみCI-チャネル活性が認められた。阻害剤の結合実験の結果などにより、このうち、100kDaタンパクがCI-チャネルと推測される。一方、二つの糖タンパクが様々なクロマトグラフィーで必ず同じ分画に存在することから、138k糖タンパクはチャネルを制御するタンパクである可能性が考えられる。電気泳動的に目的のタンパクを抽出した138kDa糖タンパクを抗原として、マウスを用いてポリクローナル抗体を作製したところ138kDa糖タンパクの他に160kDa、53kDa糖タンパクとも反応を示した。また、138kDa糖タンパクの部分アミノ酸配列の決定に成功し、相同性の検索を行ったところ、160kDa、53kDa糖タンパクの共通アミノ酸配列を持つことが分かった。以上より、これらのタンパクが共通の遺伝子からスプライシング制御を受けてつくられたタンパクであることが示唆される。また、138kDa糖タンパクのアフィニティカラムを作製してその結合タンパクを探索したところ、0.1M,0.3M KC1で溶出される分画に100kDaのタンパクが存在した。これをベシクルに再構成して脂質平面膜に組み込んだところ、0.3M KC1溶出分画でカチオンチャネル活性が観測されたが、C1-チャネル活性は観測されなかった。このチャネル活性はNeomycinにより阻害されたのでSRのmaxi-K^+チャネルである可能性がある。また、骨格筋のmRNAを注入する事によって、アフリカツメガエルの卵母細胞表面膜に、筋小胞体チャネルを発現されることに成功した。

The molecular weight of 138kDa and the molecular weight of 100kDa were determined by the lipid membrane method. The results of the combination of the inhibitor and the inhibitor are as follows: One side, two side sugar, two side sugar, three side sugar, three side sugar, two side sugar, three side sugar, two side sugar, three side sugar, three side sugar, two side sugar, three side sugar The target protein of electrophoresis was extracted from the 138kDa carbohydrate protein, and the antibody was produced from the 138 kDa carbohydrate protein and the other 160kDa and 53kDa carbohydrate protein. The determination of the partial acid alignment of the 138kDa sugar chain was successful, and the identification of the common acid alignment of the 160kDa and 53kDa sugar chain was successful. The above is a common message. It is a common message. It is a common message. The 138kDa sugar complex was found to be soluble in 0.1M, 0.3M KC1 and the 100kDa complex was found to be soluble in 0.1M, 0.3M KC1. For example, if you want to reconstitute a lipid membrane, you can use 0.3M KC1 dissolution assay to determine the activity of C1-C1. The activity of the cell is Neomycin, and the activity of the cell is neomycin, and the activity of the cell is neomycin. Oocyte surface membrane and tendon microsome were successfully developed after mRNA injection.