A.actinomycetemcomitansの熱ショック蛋白質の研究

伴放线放线菌热休克蛋白的研究

• 批准号: 06771600
• 负责人: 松本 壮吉
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771600/
• 关键词: 70kDaヒートショック蛋白質

まずターゲットとしたActinobacillus actinomycetemcomitans(A.a.)の様々な蛋白質のアミノ酸コドンの使用頻度を遺伝子バンクより検証しそれぞれのアミノ酸の最頻用コドンを特定した.次に,既にクローニングされ塩基配列の決定された他菌種の70kDaヒートショック蛋白質のデータを基に,保存された領域を検索し,最頻用コドンのデータを考慮しA.a.の70kDaヒートショック蛋白質特異的なDNAプローブを作成した.それを用いてA.a.ゲノムを鋳型にしてPCR法を行い,予想されたサイズ(およそ400bp)に増幅されたPCR産物をクローニングし塩基配列の決定を行った.その結果大腸菌由来の70kDaヒートショック蛋白質(Dna K)とDNAで53%,アミノ酸で83%の相同性を示しA.a.由来70kDaヒートショック蛋白質遺伝子が増幅されていることが分かった.次に,得られた400bpフラグメントをプローブにしてA.a.染色体を制限酵素Hind III,Spe I,Acc Iで切断しサザンハイブリダイゼイションを行った.15.0kbp(Hind III),10.0kbp(Spe I),4.0kbp(Acc I)の位置に反応する単一のバンドを確認した.(以上の結果は,歯科基礎医学会,平成10月17,18日に発表)次に,A.a.ゲノムをSpe Iで切断し,電気泳動後10.0kbpを抽出し精製した.これを大腸菌用クローニングヴェクターに挿入し遺伝子ライブラリーを作成した.コロニーハイブリダイゼイション法により70kDaヒートショック蛋白質遺伝子を含むDNAフラグメントをクローニングした.現在,それの塩基配列を決定中である.

まずターゲットとしたActinobacillus actinomycetemcomitans(A.a.) The frequency of use of the protein and the most frequent use of the protein and the most frequent use of the protein are specified. In addition, the determination of the nucleotide sequence of 70kDa protein of other species, the preservation of the domain search, the most frequently used DNA sequence of 70kDa protein of A.a. The PCR method was developed using A.a., and the PCR products were amplified by PCR (400bp). The results showed that the identity of 70 kDa protein (DNA K) and DNA was 53%, and that of amino acid was 83%. In addition, the 400bp DNA sequence was identified for A.a. chromosome restriction enzymes Hind III,Spe I,Acc I. The sequence was identified at the positions of 15.0 kbp (Hind III), 10.0 kbp (Spe I), 4.0 kbp (Acc I). (The above results were reported by the Association of Basic Medicine of Dentistry on October 17 and 18, 2011). This is the first time that a virus has been detected. 70kDa protein protein Now, we're going to have to decide.