SERA高分泌型、組み換えBCG菌の作製及び免疫原性の検討

SERA高分泌型重组卡介苗的制备及免疫原性检测

• 批准号: 14021094
• 负责人: 松本 壮吉
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021094/
• 关键词: マラリア; ワクチン; 組み換えBCG; SERA; MSP1; 赤内型

マラリア防御抗原SERA47がBCGの細胞内に留まっている組み換えBCG菌(rBCGSERA47)を培養後細胞壁を粉砕し得た細胞破砕液をマウスに免疫した。結果、rBCGSERA47の免疫では抗SERA抗体は誘導されないが、その細胞破砕液投与では、抗SERA抗体の上昇が認められた。このことから、菌体外にSERAを分泌する必要が考えられた。SERA47は中央にセリンの繰り返し配列を除く事で(SERA36)大腸菌での産生および分泌障害が改善されることが示唆されている。それでBCGからのSERA36発現を試みた。SERA47の発現構築と同様に構築し、BCGの形質転換を行ったが、SERA36の発現および分泌は全く認められなかった。キャリアーとして用いているalpha-抗原とSERAとの融合蛋白質の構造の問題が発現障害を起こしている可能性が示唆されるため、現在、alpha-抗原の立体構造解析結果を基にキャリアー蛋白質の構造を壊さない部位への挿入を計画し実験を進めており、Mycobacterium smegmatisからの分泌に成功した。昨年作製したrBCG-MSP1Cをマウスに免疫した。組み換えBCG単独では、顕著な抗体産生が認められなかった。Plasmodium yoelii(マウスマラリア原虫)由来のMSP1の場合、組み換えBCG単独免疫では抗MSP1抗体が上昇せず、原虫感染後に抗体価の上昇が見られた。同様の免疫効果がPlasmodium falciparum由来のMSP1を用いても生じている可能性を検討した。大腸菌で発現させ得られた組み換え蛋白質(MSP1)を追加免疫すると、rBCG-MSP1C免疫群のマウスでのみ抗MSP1抗体の上昇が確認された。この結果から、この組み換えBCGで免疫しておくと、P. falciparumが感染した場合速やかに抗MSP1抗体が産生される可能性が示唆された。

Sera47 is a protective antigen for BCG cells. Results: rBCGSERA47 immune response to anti-SERA antibodies induced by the administration of cell lysis solution, anti-SERA antibodies increased. It is necessary to examine the secretion of SERA in vitro. SERA47 is the central part of the system to eliminate the production and secretion of E. coli (SERA36). BCG's SERA36 was launched. SERA47's development structure and identity structure, BCG's physical transformation, SERA36's development structure and secretion structure The structure of fusion protein of alpha antigen and SERA was studied. The results of stereo structure analysis of alpha antigen and SERA were analyzed. The structure of fusion protein was studied. The secretion of Mycobacterium smegmatis was successfully carried out. Last year's production of rCG-MSP 1C BCG antibody production is recognized by the BCG alone. Plasmodium yoelii(protozoa) origin of MSP1 in the case, group, BCG alone immune to anti-MSP1 antibody rise, protozoa infection after the antibody rise The same immune effect is discussed in relation to the origin of Plasmodium falciparum and the possibility of its production by MSP1. The rise of anti-MSP1 antibodies was confirmed by the presence of additional E. coli protein (MSP1) in the rBCG-MSP1C immune group. The results showed that BCG was immune to P. falciparum and that anti-MSP 1 antibodies were produced rapidly in cases of infection.

项目成果

Sakai T, Hisaeda H, Matsumoto S. et al.: "Gene gun-based co-immunization of merozoite surface protein-1 cDNA with IL-12 expression plasmid confers protection against lethal Plasmodium yoelii in A/J mice"Vaccine. 21・13-14. 1432-1444 (2003)

Sakai T、Hisaeda H、Matsumoto S. 等人：“基于基因枪的裂殖子表面蛋白 1 cDNA 与 IL-12 表达质粒的联合免疫可在 A/J 小鼠中提供针对致命约氏疟原虫的保护”疫苗 21。 13-14。1432-1444（2003）

Yamada H, Kuroda E, Matsumoto S, et al.: "Prostaglandin E2 down-regulates viable Bacille Calmette-Guerin-induced macrophage cytotoxicity against murine bladder cancer cell MBT-2 in vitro"Clin Exp Immunol.. 128・1. 52-58 (2002)

Yamada H、Kuroda E、Matsumoto S 等人：“前列腺素 E2 下调卡介苗诱导的巨噬细胞体外对小鼠膀胱癌细胞 MBT-2 的细胞毒性”Clin Exp Immunol.. 128・1。 58（2002）

Kawahara M, Matsuo K, Nakasone T, Matsumoto S: "Combined intrarectal/intradermal inoculation of recombinant Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin (BCG) induces enhanced immune responses against the inserted HIV-1 V3 antigen"Vaccine. 21・3-4. 158-166

Kawahara M、Matsuo K、Nakasone T、Matsumoto S：“重组牛分枝杆菌卡介苗（BCG）联合直肠内/皮内接种可诱导针对插入的 HIV-1 V3 抗原的增强免疫反应”疫苗 21・3-4。 158-166

松本壮吉(分担執筆): "病原微生物学"東京化学同人. 10 (2002)

松本宗吉（合著者）：《病原微生物学》东京化学同人10（2002）。