酸分泌機構の生化学的、分子生物学的研究

泌酸机制的生化和分子生物学研究

• 批准号: 06772127
• 负责人: 浅野 真司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772127/
• 关键词: H^+,K^+-ATPase; 胃酸分泌; 能動輸送; cDNA; クローニング; 遺伝子発現; 構造一活性相関

胃H^+,K^+-ATPaseは胃酸の分泌の最終段階に携わるプロトンポンプである。H^+,K^+-ATPaseの構成サブユニット(α、β)については、そのアミノ酸一次構造が明らかになり、そのトポロジーや高次構造についての情報も増えつつある。しかしながら、その発現系の構築が困難なことが大きな障害となって、これまでH^+,K^+-ATPaseの構造と機能との相関、とりわけイオンの認識、輸送にかかわる構造、ATPの加水分解とイオンの能動輸送の共役に携わる構造についてはほとんど研究が進んでいなかった。また、最近、胃H^+,K^+-ATPaseと同じファミリーに属するプロトンポンプが大腸、腎臓などに存在することが明らかになった。そこで本年度は、胃および大腸のH^+,K^+-ATPaseの発現系の開発を中心に研究を進めた。われわれはウサギの胃粘膜からH^+,K^+-ATPase α、βサブユニットのcDNAを単離して、その5′非翻訳領域の一部を取り除いた後、哺乳類の発現ベクターに組み込んだ。これをヒト腎臓由来の培養細胞に導入すると、H^+,K^+-ATPaseとしての機能が発現され、その特異的な阻害剤であるSCH28080やScopadulcic acid Bによって濃度依存的に阻害された。また、モルモットの大腸から得られた"腸型"のH^+,K^+-ATPaseについては、βサブユニットのcDNAのクローニングに成功していないため、大腸のH^+,K^+-ATPaseのαサブユニットと胃H^+,K^+ATPaseのβサブユニットのcDNAを細胞に導入して、ハイブリッドATPaseたんぱく質を発現させることに成功した。次年度以降は、これらの系を用いて、部位特異的変異の導入、キメラATPaseを作成するなどして、引き続きこれらATPaseの構造と機能との関連を研究する予定である。

H^+,K^+-ATPase in the stomach is responsible for the final stages of gastric acid secretion. H^+,K^+-ATPase is composed of primary structure, secondary structure and tertiary structure. It is difficult to construct the development system of ATP and ATP. It is difficult to understand the structure and function of H^+,K^+-ATPase. It is difficult to study the structure and function of ATP and ATP. The H^+,K^+-ATPase in the stomach and the intestine are the same as those in the stomach. This year, the development of H^+,K^+-ATPase in the stomach and large intestine has been studied. The cDNA of H^+,K^+-ATPase α, β-ATPase in gastric mucosa was isolated and a part of the 5′ non-inverted domain was removed. The function of H^+,K^+-ATPase was developed in cultured cells derived from kidney, and specific inhibitors such as SCH28080 and Scopadic acid B were concentration-dependent inhibitors. The cDNA of H^+, K ^+-ATPase was successfully introduced into the cells of the intestine, and the cDNA of β-ATPase was successfully produced. In the next year, we will study the relationship between the structure and function of ATPase in order to improve the efficiency of ATPase production.

项目成果

Shinji Asano: "C-terminal topology of gastric H^+,K^+-ATPase" Biochemical Journal. 299. 59-64 (1994)

Shinji Asano：“胃 H^ ,K^ -ATP 酶的 C 末端拓扑”生化杂志。

Shinji Asano: "Monoclonal Antibody HK4013 Recognizes an Epitope Specific for Gastric Subtype of H^+,K^+-ATPase." Journal of Biochemistry. 116. 1069-1074 (1994)

Shinji Asano：“单克隆抗体 HK4013 可识别 H^ ,K^ -ATP 酶胃亚型特异性表位。”