アデノウイルスベクターによる造血細胞へのサイトカイン遺伝子導入と細胞動態の解析

使用腺病毒载体将细胞因子基因导入造血细胞并分析细胞动力学

• 批准号: 06772222
• 负责人: 倉田 寛一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772222/
• 关键词: アデノウイルスベクター; LacZ; GM-CSF; レセプター; コロニー・アッセイ

平成6年度の研究計画として提出した諸点につき以下の検討を行なった。(1)LacZ遺伝子を発現する組換えアデノウイルス(Ad)を血球系細胞および付着性細胞を含む各種の細胞株に感染させ,β-galactosidase活性を比濁法,フローサイトメトリーおよび細胞化学的方法により検討した。これにより,ウイルス力価,宿主細胞の接着分子受容体(ビトロネクチン・レセプター)発現量,プロモーター活性依存的に遺伝子が発現されることを明らかにした。また,発現が細胞周期非依存性であること,感染後3-5日目をピークとする一過性であることが明らかになった。従来遺伝子導入困難であったヒトprimary骨髄細胞へも高率に遺伝子導入が可能であった。(2)マウスに上記のLacZ遺伝子発現Adをを静注し,7日目をピークとする肝・脾・腎・肺組織でのβ-galactosidase発現を検出した。さらに,マウスGM-CSF発現Adを静注感染させ,骨髄および脾臓の骨髄細胞および骨髄巨核球系細胞などの増殖刺激効果を認めた。また,同ベクター感染骨髄細胞のサイトカイン無添加条件下におけるメチルセルロース・コロニー形成を認めた。(3)ヒトGM-CSFレセプターα,β鎖発現Adを作製し,Jurkat細胞上でのレセプター鎖発現を認めた。現在,primary細胞系におけるこれらの外来性レセプターの機能を検討中である。以上の結果によりAdベクターによる遺伝子導入がin vitroおよびin vivoの両者において有効であり,感染条件により遺伝子発現量をある程度制御できることを示した。今後は,シグナル伝達分子の遺伝子を発現するベクターを作製し,細胞機能の改変を検討する予定である。

The research plan for the year 2006 was proposed and the following research projects were carried out. (1)LacZ gene expression is detected by turbidimetric, cytochemical, and cytochemical methods in cell lines and dependent cells infected with various cell lines,β-galactosidase activity. The expression of host cell adhesion molecule receptors, activity-dependent receptors, and the expression of host cell adhesion molecule receptors are discussed. Cell cycle independence is observed, and transient changes occur 3-5 days after infection. It is difficult to introduce the gene into the primary bone marrow cells. It is possible to introduce the gene at a high rate. (2)The expression of Lactosidase in liver, spleen, kidney and lung tissues was detected on the 7th day after intravenous injection. Today, GM-CSF is produced by intravenous infection, bone marrow cells and megakaryocytes, and the effect of proliferation stimulation is recognized. In the absence of additives, the formation of the virus in infected bone cells was identified. (3)GM-CSF α,β-lock activation Ad activation,Jurkat cell activation Now, the primary cell line is in the process of being transformed into an alien cell line. The above results show that there are some conditions for the introduction of the gene in vitro and in vivo, and the infection conditions are controlled by the degree of gene expression. In the future, the development of molecular genes and the modification of cell functions will be discussed.

项目成果

H.Kurata: "Adenovirus-mediated gene transfer:Application to the hematopoietic system" Leukemia. (in press). (1995)

H.Kurata：“腺病毒介导的基因转移：在造血系统中的应用”白血病。

倉田 寛一: "サイトカインとレセプター" 造血因子. 5. 274-287 (1994)

Kanichi Kurata：“细胞因子和受体”造血因子。5. 274-287 (1994)

H.Kurata: "GM-CSF receptor:structure,function,and signal transduction" Advances in Biochemistry and Biology of Cells. 3. 111-155 (1994)

H.Kurata：“GM-CSF 受体：结构、功能和信号转导”细胞生物化学和生物学进展。

倉田 寛一: "アデノウイルスベクター(遺伝子治療の展望)" 診断と治療. (in press). (1995)

Kanichi Kurata：“腺病毒载体（基因治疗的前景）”诊断和治疗（1995 年）。