ミトコンドリアHSP60の生化学的・細胞生物学的研究

线粒体HSP60的生化和细胞生物学研究

基本信息

  • 批准号:
    06740627
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ラット肝臓よりミトコンドリア画分を調製し、イオン交換クロマトグラフィー、ショ糖密度勾配遠心分画法などによって、HSP60タンパク質を精製した。精製したHSP60タンパク質は、in vitroのシャペロニン活性を有していたが、得られたタンパク質量が少なく、多量のHSP60タンパク質を用いる生化学的性質の検討には、大腸菌によるHSP60タンパク質の発現系の構築が必要となった。すでに明らかにされているラットミトコンドリアHSP60遺伝子配列より適当なDNAオリゴマーを合成し、それをプライマーとして、PCR法を用いてラット肝cDNAライブラリーより、HSP60のcDNAを調製した。このcDNAを発現ベクター(pET15)に組込み大腸菌に導入し、形質転換株を大量培養し、産生したHSP60タンパク質の精製を行った。精製したHSP60の分子量をnaitive PAGE等によって測定した結果、大腸菌で発現させたHSP60タンパク質はモノマーになっていることが明らかになった。ミトコンドリアにおいてHSP60は、ヘプタマ-(7量体)のリング状構造をとっており、この発現系ではnativeな構造のHSP60のタンパク質は合成されなかった。その理由として、短時間に大量発現させたため、大腸菌内の分子シャペロン系が働けなかったこと、HSP60タンパク質のホールディング・アッセンブリーには、ミトコンドリア膜系に存在するシャペロンが必要であること、などが考えられる。現在、発現ベクターやコンピテントセルの種類や発現誘導の条件検討を行い、naitiveな、シャペロニン活性を有するHSP60タンパク質の調製を試みている。
HSP60 is a high quality protein that can be used to purify protein. It is necessary to study the biochemical properties of HSP60 and construct the production system of HSP60 in Escherichia coli. HSP60 cDNA was modulated by PCR and DNA fusion. This cDNA was developed by pET15, which was introduced into E. coli, cultured in large quantities, and purified to produce HSP60. HSP60 was purified and its molecular weight was determined by native-PAGE. HSP60 is a natural structure of HSP60, which is composed of natural structure, natural structure and natural structure. The reason for this is that it appears in large quantities in a short time. The molecular structure of Escherichia coli is very important. HSP60 is very important for the existence of membrane system. Now, we are conducting a discussion on the types of discovery objects and detection induction conditions, and are trying to modulate the quality of HSP60 to achieve naïtive and serine activities.

项目成果

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  • 财政年份:
    2019
  • 资助金额:
    $ 0.58万
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知道了