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マルチ銅酵素の構造と反応機構に関する研究

多铜酶的结构及反应机理研究

基本信息

批准号：
06760100
负责人：
岩本博行
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Fukuyama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成6年度研究代表者は、交付申請書に記載した様にマルチ銅酸化酵素であるエビタケ(Trachyderma tsunodae K-2593)由来ビリルビン酸化酵素と、糸状菌Acremonium sp.HI-25由来のアスコルビン酸酸化酵素の構造と機能に関する研究を行った。まず前者の酵素に関しては、部分アミノ酸配列をもとにオリゴヌクレオチドプライマーを合成し、PCR法でcDNAライブラリーから酵素遺伝子をクローン化した。その結果、開始コドンからポリA配列までの全長を含むクローンが得られ、その塩基配列及び推定アミノ酸配列を明らかにした。また、その配列をプロテインデータベースに対して検索したところ、相同性の高い蛋白質が見いだされた。現在本遺伝子の酵母内での発現を試みている。一方これまで研究代表者は、X線結晶解析を行うために本酵素の単結晶の調製を試みてきた。しかしながら昨年度までに得られた結晶はX線回析像を示さず、結晶解析には適さない事が判明した。そこで本年度は多様な結晶化条件を試みたところ、これまでに得られたものとは結晶形が異なり、しかも明瞭な偏光を示す結晶が得られた。そこで、今後はこの結晶がX線解析に適するかどうかを確かめ、酵素の立体構造の解析を行う予定である。次に後者のAcremonium由来のアスコルビン酸酸化酵素については、これまで研究代表者らは本酵素が高等植物由来のアスコルビン酸酸化酵素の単量体とよく似た反応速度論的及び分光学的性質を持つことを明らかにしてきた。そこで本年度は、本酵素および上記のビリルビン酸化酵素のタイプ1銅の酸化還元電位を測定したところ、Acremonium由来のアスコルビン酸酸化酵素の酸化還元電位は、ラッカーゼやビリルビン酸化酵素に比べて低く、高等植物由来のアスコルビン酸酸化酵素に近いことが判明した。

FY2006 research representative, delivery application form, origin of copper acidifying enzyme, Trachyderma tsunodae K-2593, Acremonium sp.HI-25 originates from the research and development of the structure and function of acid acidifying enzyme.まずformer enzyme に关しては, partial アミノ acid ligation をもとにオリゴヌクレオチドプライMacro synthesis, PCR method and cDNA synthesis using enzymes.そのResult, start of コドンからポリA arrangement までのfull length をcontaining むクローンが得られ, その塩 radical arrangement and びputative アミノ acid arrangement を明らかにした.また, その配array をプロテインデータベースに対して検SO したところ, similarity の高いprotein が见いだされた. Now, the yeast inside the yeast of the original vine is now みている. He is one of the representatives of the research team, and he is a representative of X-ray crystallization analysis and preparation of this enzyme. Yesterday, the results of the crystallization and X-ray analysis showed that the results were clear last year.そこでThis year's は多様なcrystallization conditionsをtestみたところ、これまでに得られThe たものとは crystal form is different and the しかも明なpolarized をshows the crystal form and is obtained られた.そこで、The future of crystallization and X-ray analysis of X-ray analysis and determination of the three-dimensional structure of enzymes. The origin of Acremonium is the origin of Acremonium acid acidifying enzyme. The origin of the substance is the monotonic substance of the acid-containing enzyme, its reaction rate theory and its spectroscopic properties.そこでThis year's は, this enzyme および上记のビリルビン acidifying enzyme のタイプ 1 copper のAcidification reduction potential measurement method, Acremonium origin method The acidification reduction potential of the acid acidifying enzyme, the acidification reduction potential of the ラッカーゼやビリルビン acidifying enzyme, the ratio The origin of てlow く and higher plants is のアスコルビン acid acidifying enzyme にNearly いことが clarified した.