組換えハンタウイルス核蛋白を用いたRNPトランスフェクション系の確立

重组汉坦病毒核蛋白RNP转染体系的建立

• 批准号: 06760274
• 负责人: 吉松 組子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760274/
• 关键词: ハンタウイルス; 核蛋白; 持続感染細胞; モノクローナル抗体; 組換えバキュロウイルス; カイコ

これまでに、私は蚕のバキュロウイルス系を用いて、ハンタウイルスの核蛋白を大量に発現するシステムを開発してきた.今回の研究では、この組換え蛋白を用いて、RNPトランスフェクション系を確立する事を目的とした.ハンタウイルス核蛋白を蚕のヘモリンフ中に発現させた場合、不溶性となる.この不溶性蛋白は、尿素及びグアニジン塩酸塩で可溶化され、特に尿素存在下で陰イオン交換クロマトグラフィーを行った場合、可溶性の蛋白として精製が可能である.しかしながら、この蛋白は消化を受け、フラグメント化されている場合が多い.これをさらに精製し、全長の核蛋白のみを精製するため、核蛋白に対するモノクローナル抗体を使ったAffinity精製を試みた.結果は収率は著しく低いものの、全長を含む核蛋白も精製が可能であった.しかしながら、これらの核蛋白に対するモノクローナル抗体を用いて精製した場合、それぞれの抗体の認識部位によって精製されるフラグメントが異なる.このため、これらの抗体の一次構造上の認識部位を決定しておく必要が生じた.また、Derai et alは大腸菌による発現組換え蛋白がRNA結合能を保持していたことを報告している.このため、大腸菌の発現系を利用し、抗原部位の決定を試みた.結論は、比較的効率よく全長の組換え蛋白を精製できるモノクローナル抗体は、立体構造認識の一部の単クローン抗体と、N末端を認識する抗体であった.中央部を認識する抗体は、多くのフラグメントを結合したので、今回の目的には適さないことがわかった.ハンタウイルス持続感染Vero細胞は3世代までのPassageには支障がなかった.このウイルスは持続感染しやすく、細胞の増殖には影響がないようであり、持続感染株の樹立は容易であると考えられる.今年度の計画は、最終目標まで到達することはできなかったが、その準備は十分にできたと考えられる.

You can use a large amount of nuclear protein to make sure that there is a large amount of equipment in the system. The purpose of this study is to make sure that the purpose of the study is to ensure that the protein is used in this study, and that the protein is used in RNP. The nucleoprotein of the silkworm, Bombyx mori, was found to be conjugated and insoluble. Insoluble protein, urea, soluble acid, soluble protein, soluble protein and soluble protein. The protein is digested, the protein is digested, and the protein is digested. Full-length nuclear protein test, full-length Affinity sperm test, nuclear protein test, anti-DNA antibody test, DNA antibody test. Results the results showed that low temperature and full-length nucleoprotein-containing seminal protein may be affected. The antibodies were linked to the nucleoprotein, the nucleoproteins, the antibodies, the antibodies. It is necessary to determine whether it is necessary to have an antibody. The combination of tissue protein RNA and Derai et al was able to maintain the accuracy of the report. The use of antigens and the determination of antigenic sites are important for the use of bacteria. Results the results showed that the whole length of protein, protein, antibody, stereospecific antibody, N-terminal antibody and N-terminal antibody were detected. The central department is aware of the antibody, multi-agent system, and the combination of the antibody and the antibody. This time, the purpose is to improve the quality of the antibody. We have been infected with Vero cells for three generations. We have been infected with Passage cells. It is easy to test the infection rate of the infected strain, the infection rate, the infection rate and the infection rate. This year's "Plan", the most important goal is to prepare for this year's planning and preparation.