細胞内抗体導入(スクレイプロ-ディング)法でのハンタウイルス核蛋白の機能の解析

胞内抗体引入（刮片加载）法分析汉坦病毒核蛋白功能

• 批准号: 07856033
• 负责人: 吉松 組子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07856033/
• 关键词: ハンタウイルス; 核蛋白; 感染防御; エピトープ; 細胞内抗体導入法

ハンタウイルスは腎症候性出血熱の原因ウイルスで、ブニヤウイルス科に属するRNAウイルスである。この研究ではハンタウイルス核蛋白の誘導する液性抗体の感染防御について明らかにすることを目標として感染防御に有効なエピトープ領域の決定を行なった。1次構造上の抗原領域の決定; 大腸菌を使ってハンタウイルスHantaan 76-118株の核蛋白の様々な部分を組換え蛋白として発現させ、単クローン抗体との反応性を調べ、単クローン抗体の認識部位を明らかにした。リニアエピトープを認識する単クローン抗体E5/G6についてはcDNAから予想されるアミノ酸配列を元にペプチドを合成し反応性を確認し、エピトープの特定を行なったところ,アミノ酸166-175の配列,EDVNGIRKPKであることが明らかとなった。またこの実験に付随して,ハンタウイルスの核蛋白のアミノ酸1から103がimunodominant領域であることが分かった.すなわち,人及び動物がハンタウイルスに感染したとき,核蛋白に対する抗体が強く誘導されるが,そのほとんどのリニアエピトープはこの領域に集まっていることが明らかとなり,診断抗原として有用な領域であることが分かった。また、立体構造依存性のエピトープについては,バキュロウイルスでの同様の実験から,この1-103の領域と200-300の領域にもにも存在することが示唆された。スクレープロ-ディング法及びマウスでの感染防御活性を持つ単クローン抗体E5/G6の認識するエピトープは,アミノ酸166-175の感染によってほとんど抗体の誘導されない領域であることが明らかとなった.今後,この領域に対する抗体を効率よく誘導する免疫方法を検討することが必要であると考えられる.

ハ ン タ ウ イ ル ス は kidney hemorrhagic fever symptoms sex の reason ウ イ ル ス で, ブ ニ ヤ ウ イ ル ス に genera す る RNA ウ イ ル ス で あ る. こ の research で は ハ ン タ ウ イ ル ス nucleoprotein の induced す る liquid antibody の infection defense に つ い て Ming ら か に す る こ と を target と し て infection defense に unseen な エ ピ ト ー の プ field line decision を な っ た. 1. The antigenic domain is determined by the sequence. Coliform を make っ て ハ ン タ ウ イ ル ス Hantaan 76-118 strains の nucleoprotein の others 々 な part を protein group in え と し て 発 now さ せ, 単 ク ロ ー ン antibody と の anti 応 sex を べ, 単 ク ロ ー ン antibody の を Ming know parts ら か に し た. リ ニ ア エ ピ ト ー プ を know す る 単 ク ロ ー ン antibody E5 / G6 に つ い て は cDNA か ら to think さ れ る ア ミ ノ acid with column を yuan に ペ プ チ ド を synthetic し 応 sex を confirm し, エ ピ ト ー プ の specific line を な っ た と こ ろ, ア ミ ノ acid の match column, 166-175 EDVNGIRKPK で あ る こ と が Ming ら か と な っ Youdaoplaceholder0. Pay with し ま た こ の be 験 に て, ハ ン タ ウ イ ル ス の nucleoprotein の ア ミ ノ acid 1 か ら 103 が imunodominant field で あ る こ と が points か っ た. す な わ ち, people and animals び が ハ ン タ ウ イ ル ス に infection し た と き, nucleoprotein に す seaborne が strong く る antibody induction さ れ る が, そ の ほ と ん ど の リ ニ ア エ ピ ト ー プ は こ に の field set ま っ て い る こ と が Ming ら か と な り, diagnostic antigen と し て useful な field で あ る こ と が points か っ た. ま た, three-dimensional structure dependability の エ ピ ト ー プ に つ い て は, バ キ ュ ロ ウ イ ル ス で の with others の be 験 か ら, こ の と の field 1-103 200-300 の field に も に も exist す る こ と が in stopping さ れ た. ス ク レ ー プ ロ - デ ィ ン グ method and び マ ウ ス で の infection defense activity を hold つ 単 ク ロ ー ン antibody E5 / G6 の know す る エ ピ ト ー プ は, ア ミ ノ acid 166-175 の infection に よ っ て ほ と ん の ど antibody induction さ れ な い field で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Henceforth, こ の field に す seaborne る antibody を sharper rate よ く induced す る immune method を beg す 検 る こ と が necessary で あ る と exam え ら れ る.

项目成果

Yoshimatsu,K.: "Characterization of the nucleoaspsid protein of Hantaan virus strain 76-118 using monoclonal antibodies" Journal of General Virology. 77. 695-704 (1996)

Yoshimatsu,K.：“使用单克隆抗体表征汉坦病毒株 76-118 的核壳蛋白”《普通病毒学杂志》。

Yoshimatsu,K.: "Production of recombinant hantavirus nucleocapsid protein expressed in silkworm larvae and its use as a diagnostic antigen in detecting antibodies in serum from infected rats" Laboratory Animal Science. 45. 647-651 (1995)

Yoshimatsu,K.：“在家蚕幼虫中表达的重组汉坦病毒核衣壳蛋白的生产及其作为诊断抗原在检测感染大鼠血清中的抗体中的应用”《实验动物科学》。