肝臓ギャップ結合の単位粒子には異なる構成蛋白コネキシンが混在しているのか

不同的组成蛋白（连接蛋白）是否共存于肝脏间隙连接的单位颗粒中？

• 批准号: 06770014
• 负责人: 倉岡 晃夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770014/
• 关键词: ギャップ結合; 細胞間結合; コネキシン; コネクソン; 高速液体クロマトグラフィー; 肝臓

ギャップ結合の基本単位粒子であるhemichannel(コネクソン)は構成蛋白コネキシン(Cx)の6量体である。本研究ではこの単位粒子レベルでの異種コネキシン蛋白の混在様態につき、Cx32とCx26が共存する肝ギャップ結合膜をモデル系とし検討を加えた。1.形態分析:界面活性剤(dodecyl maltoside)処理した肝ギャップ結合膜フラクションにつき急速凍結ディープエッチレプリカ法およびネガティブ染色法にて電顕観察を行なったところ、直径9nm前後のほぼ均一な粒子が観察され、それらの中央には親水性通路と推定される構造が認められたことから、目的のhemichannel粒子であることが確認された。Cx32とCx26の構成比の異なるラットおよびモルモット肝由来の単位粒子間には特に形態学的な差異は認められなかった。2.生化学的分析:飽和濃度以下のクロスリンカーで処理した試料をSDS-PAGEで展開しウェスタン分析を行なったところ、抗Cx32抗体と抗Cx26抗体は明らかに異なるバンドをそれぞれ標識したことから、単位粒子は単一のコネキシン蛋白で構成されることが示唆された。また阪大蛋白研との共同研究で、高速液体クロマトグラフィーを用いた単位粒子分画の精製溶出条件が明らかになった。この条件下での溶出分画のSDS-PAGE分析からCx32とCx26は常に同期して溶出され、少なくともCx32もしくはCx26のみから構成される単位粒子間には大きなサイズの差がないことが示唆された。今後、分子量分析のための各種パラメーターを測定し、分析超遠心法などによる精密な分子量測定によって単一hemichannel中の蛋白構成を明らかにしたい。

ギ ャ ッ プ with basic の 単 a particle で あ る hemichannel (コ ネ ク ソ ン) は constitutes protein コ ネ キ シ ン (Cx) の 6 quantity body で あ る. This study で は こ の 単 a particle レ ベ ル で の heterogeneous コ ネ キ シ ン protein の mixed in others states に つ き, Cx32 と Cx26 が coexistence す る liver ギ ャ ッ プ combining membrane を モ デ ル department と し を 検 please add え た. 1. Morphological analysis: Interfacial activator (dodecyl Maltoside) 処 Richard し た liver ギ ャ ッ プ combining membrane フ ラ ク シ ョ ン に つ き quick freezing デ ィ ー プ エ ッ チ レ プ リ カ method お よ び ネ ガ テ ィ ブ staining に て electric 顕 観 examine を line な っ た と こ ろ, diameter before and after 9 nm の ほ ぼ な uniform particle が 観 examine さ れ, そ れ ら の central に は hydrophilic channel と presumption さ れ る tectonic が recognize め ら れ Youdaoplaceholder0 された と ら ら ら target hemichannel particle である とが とが confirm された. Cx32 と Cx26 の composition than の different な る ラ ッ ト お よ び モ ル モ ッ ト liver origin の 単 bit between particles に は に morphology of な differences は recognize め ら れ な か っ た. 2. Biochemistry analysis: the saturated concentration below の ク ロ ス リ ン カ ー で 処 Richard し た sample を sds-page で expand し ウ ェ ス タ ン line analysis を な っ た と こ ろ, anti-stress Cx32 antibody と Cx26 antibody は Ming ら か に different な る バ ン ド を そ れ ぞ れ logo し た こ と か ら, 単 particle は 単 a の コ ネ キ シ ン protein で さ れ る Youdaoplaceholder0 indicates された. ま た e. large protein research と で の studies together, high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を with い た 単 particle points draw の refined dissolution conditions が Ming ら か に な っ た. こ の conditions で の dissolution points draw の sds-page analysis か ら Cx32 と Cx26 は often に period し て dissolution さ れ, less な く と も Cx32 も し く は Cx26 の み か ら constitute さ れ る 単 bit between particles に は big き な サ イ ズ の poor が な い こ と が in stopping さ れ た. In the future, the molecular weight analysis の た め の various パ ラ メ ー タ ー を determination し, analytical method to vast な ど に よ る molecular weight determination precision な に よ っ て 単 の protein components in a hemichannel を Ming ら か に し た い.

项目成果

Kuraoka,A.: "Immunocytochemical studies of major gap junction proteins in rat salivary glands." European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251. S95-S99 (1994)

Kuraoka,A.：“大鼠唾液腺中主要间隙连接蛋白的免疫细胞化学研究。”

Itoh,K.: "Expression of tissue-type plasminogen activator and its inhibitor couples with development of capillary network by human microvascular endothelial cells on matrigel." Journal of Cellular Physiology. 162. 213-224 (1995)

Itoh,K.：“组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂的表达与基质胶上人微血管内皮细胞毛细血管网络的发育相结合。”

Sekiguchi,T.: "Apoptosis is induced in BHK cells by the tsBN462/13 mutation in the CCG1/TAFIID basal transcription factor." Experimental Cell Research. (印刷中). (1995)

Sekiguchi, T.：“CCG1/TAFIID 基础转录因子中的 tsBN462/13 突变诱导 BHK 细胞凋亡”（实验细胞研究）。