精神疾患特異的に構造変化を示す遺伝子のクローニング

克隆表现出精神疾病特有结构变化的基因

• 批准号: 06857067
• 负责人: 池田 正明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857067/
• 关键词: 精神疾患; ゲノム; レアレンジメント; トリプレット リピート; 大脳皮質; クローニング; PCR

精神神経疾患の原因遺伝子にはゲノムのレアレンジメント(rearrangement)を伴った例がみられ、その中でも最近CAGやCGGなどの3塩基のリピート配列の伸長が起っているものが次第に明らかにされてきている。精神神経疾患において3塩基の伸長などのゲノムのレアレンジメントの存在を検討するため、先ず中枢神経系において発現するCAGなどの繰り返し配列を有する遺伝子の単離を試みた。〈方法〉ラット大脳皮質cDNAライブラリーのファージストックより調製したcDNA mixtureを鋳型として(CAG)_<10>あるいは(CTG)_<10>とファージDNA配列をプライマーに用いてPCRを行ない、得られたPCR産物をpCRIIにクローニングした。得られたクローンをSanger法あるいはオートシークエンサーを用いて塩基配列を決定した。〈結果〉(CAG)_<10>プライマーを用いたPCR産物をアガロース電気泳動を用いて解析した結果、多数のバンドが得られていることが明かとなった。これらのPCR産物をpCRIIにライゲーションし、インサートの有無を調べた結果、40個のクローンが得られていた。このうち12クローンの塩基配列を決定しGenBankデータベースをホモロジーサーチしたところ11クローンが未登録のcDNAであることが明かとなった。CAG-32は、ヒトlymphoblastoid cell line cDNAよりクローニングされたHSA72A091など5つの機能未同定の遺伝子と部分的にホモロジーの高いことが示された。〈考察・今後の展望〉今回得られたクローンのインサートサイズは約300-700塩基対であり、比較的短いインサートであったが、これはPCRとライゲーションの特性によるものと思われた。今後はすべてのクローンの全長のクローニングを行ない全塩基配列を決定すると共に、FISH(Fluorescence in situ hybridization)法によって遺伝子座を同定し、精神神経疾患とリンクすると考えられる座位と一致したクローンに関して疾患家系における連鎖やリピートの伸長を検討していく予定である。

The causes of mental disorders include the following: 1. the most recent CAG, CGG, 3-D, 3-D, 3-D, 3- Mental disorders in the central nervous system in the development of the CAG, the CAG, the CAG The method of DNA sequencing for large cDNA fragments is described in the following table: cDNA mixture type (CAG)<10>_sequence (CTG)<10>_sequence (pCRII). The Sanger Method is used to determine the base configuration. &lt;Results&gt;(CAG)_p-p-p<10>- The PCR product was found in 40 samples. The base sequence of this gene was determined by GenBank. CAG-32 is a new type of lymphoblastoid cell line cDNA. It has been developed by HSA72A091. It has five different functions. &lt;Review of the future&gt; The current situation is about 300-700 years old.&lt;/p&gt;&lt;p&gt;&lt;p&gt; In the future, the total length of the disease can be determined by FISH(Fluorescence in Situ Hybridization) method, and the length of the disease can be determined by FISH method.