増殖細胞におけるCdk2の細胞内輸送とp27によるCdk2活性の制御機構の解明

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サイクリン依存性キナーゼ(Cdk)の一つであるCdk2は、細胞周期のG1後期からS期に活性化され、DNA複製に中心的な働きをしている。本研究は、Cdk2の核内における制御機構について新たな知見を得ることを目指している。1.新しい核細胞質分画法の確立従来の核細胞質分画法では、低分子量タンパク質の核外への漏出を防ぐことが出来ないことが判明した。そこで、界面活性剤の種類・濃度、塩濃度、浸透圧等の細胞溶解条件の詳細な検討をおこない、核内低分子量タンパク質の漏出が少ない核細胞質分画法を確立した。この方法は、タンパク質の核と細胞質の分布を解析するための有力な手段となると考えられる。2.クロマチン上でのCdk2活性制御機構の解析昨年度の解析で、クロマチン非結合Cdk2は、非イオン性界面活性剤で容易に抽出されるのに対して、クロマチン結合Cdk2は抽出されないことを見出した。さらに、クロマチン結合Cdk2が、その活性を保ったまま高塩濃度処理により抽出されることを明らかにした。そこで本年度は、核内に局在するクロマチン結合および非結合Cdk2を分離し、Cdk2の活性およびCdk2を制御する因子との相互作用を生化学的に解析した。その結果、クロマチンに結合したCdk2は、サイクリンを含むCdk2制御因子と複合体を形成していることが分かった。以上の結果からクロマチン上においてCdk2が制御を受けていることが示唆された。