DRIL1の機能解析と口腔発癌における関与

点击翻译按钮获取中文摘要

本共同研究では、DRIL1がp53と協調的に働く転写因子としてp53標的遺伝子とp53蛋白質の両方に結合し、p53の翻訳後修飾を仲介する重要な因子であることを明らかにするとともに、DRIL1遺伝子の異常が口腔癌におけるp53耐性機序の獲得に関与している可能性を検討することを目的としている。(1)p53による転写制御におけるDRIL1の役割既に癌抑制遺伝子p53の制御に重要なPMLタンパク質が核マトリクス結合因子DRIL1と直接結合することを明らかにしている。本年度はDNA障害で誘導された内在性p53が内在性DRIL1と結合することを見出した。さらにp53とDRIL1がin vitroで直接結合する知見を得た。(2)p53タンパク質の翻訳後修飾におけるDRIL1の役割siRNAを用いたDRIL1ノックダウン実験の結果、p53の機能が著しく抑制されることを見出している。さらに詳細に解析するため、導入効率の高いアデノウイルスを用いてshRNA発現ベクターを用いて実験をおこなったが、十分なノックダウン効果が得られなかった。現在、使用するベクターをより長期間の発現に優れたレンチウイルスベクターに変更して解析をおこなっている。(3)口腔癌細胞株癌におけるDRIL1の制御異常口腔癌細胞株癌におけるp53の制御異常について、セリン46のリン酸化障害がp53のアポトーシス誘導に対する口腔癌細胞株の抵抗性獲得に重要であることを既に報告している。本年度、DRIL1とp53を同時にp53抵抗性細胞株に導入するとアポトーシスが誘導されることを見出した。さらにp53のリン酸化非依存性にp53を直接活性化する化学物質ニュートリン3を用いてさらに解析し、ニュートリン3存在下でもp53によるアポトーシス誘導にはセリン46のリン酸化が必要であることを見出した。