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異所性骨形成における骨基質蛋白の局在と遺伝子の発現

异位骨形成中骨基质蛋白的定位和基因表达

基本信息

批准号：
06857134
负责人：
長塚仁
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857134/
关键词：
BMP 骨基質蛋白 in situ hybridization

项目摘要

粗精製BMPを用い、可溶化I型コラーゲンを支持体としたペレットとした。実験動物は4週齢Wistar系ラットを用い、背部皮下にペレットを埋入し、埋入後1週から3週に亘り観察を行った。観察期間に従って複合体を含む皮下組織を摘出、4%パラホルムアルデヒドで固定、10%EDTAで脱灰、または非脱灰でパラフィン包埋し、厚さ約4μmのパラフィン切片を作製した。m-RNAの検出は、DIG RNA Labeling Kit(Boehringer Mannhein)を用いてステオポンチン(OPN)、オステオネクチン(ONC)、および骨特異的とされているオステオカルシン(OCN)の各cDNAから合成したsingle strand RNA probeを調製し、in situ hybridizationを行った。埋入後1週では、OPNのシグナルは、類骨形成部位のplumpな形態を示す細胞に強く、ONCのシグナルは、紡錐形を示す線維芽細胞様細胞に強く認められた。OCNのシグナルは観察されず、免疫組織化学的な局在も認められなかった。2週においては、軟骨様組織が広範に認められ、標本最外周部では骨様組織の形成が認められた。OPN,ONCのシグナルは、軟骨、あるいは骨様組織形成部位の広範な細胞で認められた。さらにOCNのシグナルは、軟骨様組織形成部位の一部と最外周部の骨様組織形成部において、骨細胞、および骨芽細胞で認められた。3週では、軟骨様組織は大部分消失し、未熟な骨梁が標本のほぼ全体を占めた。この時期では、OPNのシグナル発現細胞は減少する傾向を示したが、骨梁周囲の骨芽細胞を主体として強いOCNのシグナルが観察され、同部位において免疫組織化学的な局在も観察された。粗精製BMPによる異所性骨誘導における骨基質蛋白の遺伝子発現は、骨組織の形成に伴って認められたが、軟骨様組織におけるOCNの発現のような特徴的な様式を示した。以上の研究成果の一部は、第3回国際口腔インプラント会議(横浜、1994)、第36回歯科基礎医学会総会(大阪、1994)、第48回口腔科学会総会(大分、1994)において発表した。

Coarse BMP The animals were buried under the skin for 4 weeks and observed for 3 weeks after burial. During the observation, the complex was extracted from subcutaneous tissue, fixed at 4% EDTA, deashed at 10% EDTA, embedded at 4% EDTA, and sectioned at a thickness of about 4μm. m-RNA detection, DIG RNA Labeling Kit(Boehringer Mannhein) is used in the preparation of single strand RNA probes and in situ hybridization. 1 week after implantation, OPN, plump morphology of bone-like formation site, cell strength, ONC, plump morphology, and cell strength were observed. OCN is detected by immunohistochemistry. 2 weeks later, the cartilage tissue formed in the outermost part of the cartilage tissue. OPN,ONC, cartilage, bone tissue formation site, cell recognition. OCN, cartilage tissue formation part, bone tissue formation part of the outermost part, bone cells, bone bud cells 3 weeks later, most of the cartilage tissue disappeared, and the immature bone beam was occupied by the whole body. This time, OPN cells were found to decrease in the body, and OPN cells were found to decrease in the body. Immunohistochemical staining was performed at the same site. The expression pattern of mRNA of bone matrix protein in rough BMP and allogeneic bone induction, bone tissue formation, cartilage tissue formation and OCN expression is shown. The results of these studies were presented at the 3rd International Conference on Dental Science (Yokohama, 1994), the 36th General Meeting of the Society of Basic Dental Medicine (Osaka, 1994), and the 48th General Meeting of the Society of Stomatology (Oita, 1994).