ヒト神経芽腫転移には癌転移抑制遺伝子nm23は関与するか

癌症转移抑制基因 nm23 是否与人神经母细胞瘤转移有关？

• 批准号: 07771594
• 负责人: 吉澤 穣治
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771594/
• 关键词: 神経芽腫; 転移; nm23; 転移抑制

【研究の目的】癌転移関連遺伝子としてはnm23を用いて、高転移能を有する神経芽腫細胞にエレクトロポレーション法により遺伝子導入を行ない、遺伝子導入前後の転移能をin vivoで確認する。【方法】ヒト神経芽腫細胞株であるNB-1,GOTO,をMEN(10%FCS)(GIBCO)細胞培養液を用いて、CO_2インキュベータ-中で維持する。PUC118プラスミッドに導入したSR_αプロモーターの下流にさらにnm23のcDNAを導入して、EcoR1で切断して、得られたDNAを神経芽腫細胞NB-1,GOTOにそれぞれエレクトロポレーション法によりトランスフェクションする。遺伝導入した1×10^6個の神経芽腫細胞をプロテイナーゼを用いて50℃、12時間で振倒溶解して、10000r.p.mで20分間遠心分離して、上清を採取して、フェノール、クロロホルム処理により除蛋白後、エタノール沈殿法によりDNAを抽出する。このDNAを制限酵素BamH1を用いて切断後、10%アガロースゲルに電気泳動法により分離展開後、ニトロセルロース膜に吸着させて、^<32>pでラベリングしたnm23遺伝子をプローブとしてハイブリダイゼーションとして遺伝子導入を確認する。【結果】神経芽腫細胞NB-1,GOTOにnm23のcDNAを導入することに成功した。今後は、遺伝子導入された細胞に転移能の検討を施行したいと考えている。

[Objective] To confirm in vivo the presence of cancer metastasis-related genes in the presence of nm23 and high migration energy in neuroblastoma cells by means of gene introduction and gene transfer before and after gene introduction [Methods] The neuroblastoma cell lines NB-1,GOTO, MEN(10%FCS)(GIBCO) were maintained in medium with CO_2 and CO_2. PUC118 was introduced into the downstream of the SR_α receptor, including nm23 cDNA, EcoR1 was cut, and DNA was obtained from the neuroblast-cell NB-1,GOTO was introduced into the downstream of the SR_α receptor. 1×10^6 neuroblastoma cells were introduced into the culture medium at 50℃ for 12 hours, and then subjected to centrifugation at 10000r. p.m. for 20 minutes. The supernatant was collected, processed, and DNA extracted. After the DNA restriction enzyme BamH1 was cleaved, 10% of the DNA was removed from the membrane by electrophoresis, and the <32>nm23 gene was introduced into the membrane. [Results] The cDNA of nm23 was successfully introduced into neuroblastoma cells NB-1,GOTO. In the future, the introduction of DNA into the cells will be discussed in detail.