高度好塩菌における、代謝などのストレス負荷により誘導される抗癌剤排出蛋白の同定

高嗜盐细菌代谢应激负荷诱导的抗癌药物流出蛋白的鉴定

• 批准号: 07772127
• 负责人: 宮内 正二
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772127/
• 关键词: matabolic stress; glucose-induced MDR; amino acid-induced MDR; Haloferax volcanii; ATP binding cassette

過剰量の様々な栄養物質により活性化する抗癌剤排出ポンプ:抗癌剤を含む培地で培養しなくても、過剰量のグルコース、アミノ酸、アルコール存在下での培養により抗癌剤排出ポンプが誘導されてくることを明きらかにした。この活性化にはこれらの代謝が必須であることが明らかにした。通常の培地で培養した場合でも、少ないながらも排出活性が観察された。更に、これら誘導されてくる排出ポンプが同一であるか否かについて検討をおこなった。これら誘導されてくるポンプのエネルギー系はATPの加水分解であった。一方、ATP依存性は、抗癌剤により誘導されてくるポンプと過剰量アミノ酸により誘導されてくるものと同じであたったが、糖による誘導は異なっていた。このことにより、過剰量の糖により誘導されてくる排出ポンプは、抗癌剤あるいは過剰量アミノ酸により誘導されてくるものと異なることが示唆された。また、抗癌剤により誘導される排出ポンプ、過剰量グルコースにより誘導されるもの、内在的に存在するものは、基質特異性、阻害剤による阻害曲線が異なるという結果も得られており、いくつもの排出ポンプが存在すると推察された。現在、これら排出ポンプの分子種のシークエンスを行っている。5P-糖蛋白類似排出ポンプの遺伝子クローニング:抗癌剤、アミノ酸、及びグルコースにより誘導されてくる排出輸送担体性質が少しずつことなるが、どの輸送担体もATP依存的であり、ATP binding cassette(ABC)を有していると予想される。ABCの一部であるB-motifの保存配列をprimerとしてPCRをかけ、0.6kbp,1kbp,1.8kbpの産物が得られている。このPCR産物は、排出輸送担体の一部であると考えられる。このシークエンスを行った。現在、このPCR産物のなかに、排出ポンプの候補となるクローンをえており、排出ポンプの全シークエンスを行っている。

抗癌药外排泵被多种营养素激活的泵：已经发现，即使在含有抗癌剂的培养基中培养的情况下，抗癌剂外排泵也会通过在存在过量的葡萄糖，氨基酸和酒精的情况下培养而诱导。已经表明，这些新陈代谢对于这种激活至关重要。即使在正常培养基中培养，尽管观察到少量的外排活动。此外，我们研究了这些诱导的排放泵是否相同。这些诱导的泵的能量系统是ATP的水解。另一方面，ATP依赖性与抗癌剂和过量氨基酸诱导的泵诱导的泵相同，但糖的诱导却不同。这表明由过量糖引起的外排泵与抗癌剂或多余氨基酸诱导的糖不同。此外，结果表明，抗癌剂诱导的外排泵的底物特异性和抑制曲线，抗癌剂诱导的葡萄糖诱导的泵，而葡萄糖诱导的泵以及抑制剂的底物特异性和抑制曲线的内源性不同，并且估计有几个外排泵。目前，我们正在测序这些外排泵的分子物种。 5p-糖蛋白样外排泵的基因克隆：尽管由抗癌剂，氨基酸和葡萄糖诱导的外排运输载体的特性略有不同，但所有传输载体均取决于ATP，并且预计将具有ATP结合的盒（ABC）。 B-MOTIF的保守序列是ABC的一部分，是底漆，以获得0.6KBP，1KBP和1.8KBP产品。该PCR产品被认为是外排运输载体的一部分。此序列是进行的。当前，该PCR产品的克隆是排放泵的候选者，并且正在执行排放泵的整个序列。

项目成果

Koichi Kaidoh: "Rhodamis 123 efflus transporter in Haloferax volcanii is induced when culsured under ‘matabolic stress'by amino acids the efflus system resembles that in Dox-resistant mutant" Biochemical Journal. 314. 355-359 (1996)

Koichi Kaidoh：“Haloferax volcanii 中的 Rhodamis 123 流出转运蛋白在氨基酸‘代谢应激’下被诱导，该流出系统类似于 Dox 抗性突变体”《生化杂志》314. 355-359 (1996)。

Masaki Komatsubara: "Doxorubicin-efflus pump in Haloferax volcanii is energized by ATP" FEMS Microbiology Letters. (in press). (1996)

Masaki Komatsubara：“Haloferax volcanii 中的阿霉素流出泵由 ATP 提供能量”FEMS 微生物学快报。