古細菌の一種、高度好塩菌に存在する抗癌剤排出蛋白の分離精製及びその排出機構の解明

古细菌高嗜盐细菌中存在的抗癌药物排泄蛋白的分离和纯化以及排泄机制的阐明

• 批准号: 05857251
• 负责人: 宮内 正二
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857251/
• 关键词: 多剤耐性; P-糖タンパク; 能動輸送

我々は、古細菌に属する高度好塩菌が動物細胞においてみられる抗癌剤に対する耐性機構を獲得し、その耐性機構が特殊な輸送担体を介した能動的排出によることを明らかにした。この排出は、Ca^<2+>拮抗薬により阻害されるなど、ヒトのP-糖蛋白に近い性質を有している。更に、能動的排出に利用されるエネルギーの検討を行ったところ、排出活性は細胞内ATPを非常に良く相関した。ATPの加水分解エネルギーを用いて排出を行っていることが示唆された。この抗癌剤排出蛋白をより詳細に検討をこなうため精製を行った。先ず、野生株及び耐性株を大量培養し、膜蛋白の検討を行った。SDS電気泳動パターンより、90KDa付近に耐性株特異的に多量発現している膜蛋白の存在が確認された。また、抗ヒトP-糖蛋白マウス・モノクローナル抗体(JSB-1)を用いたウェスタンブロットを行った。この結果、JSB-1はこの90KDaを特異的に認識した。ヒトのP-糖蛋白マウス・モノクローナル抗体(JSB-1)を用いたウェスタンブロットを行った。この結果、JSB-1はこの90KDaを特異的に認識した。ヒトのP-糖蛋白と比べて好塩菌の排出蛋白の分子量は約半分の値を示す。ヒトP-糖蛋白は、左右対照の構造をとっており、半分で排出機能を有していることは、大変興味深い。また。JSB-1で認識することより、好塩菌に存在する抗癌剤排出蛋白は、ヒトP-糖蛋白に近い構造を有していることが示唆される。この知見は、P-糖蛋白のルーツの考察に寄与すると考えられる。現在、オクチルグリコシドを用いて膜分画を可溶化し、この抗体との結合を指標として用いて精製を試みている。来年度は、本バクテリアに於て発現しているであろうP-糖蛋白類似輸送担体を同定分離精製を行い、物理化学的および分子生物学的観点からこの蛋白を研究する。この実験結果に基づいて抗癌剤排出のメカニズム(エネルギー変換機構)を詳細に検討してゆくつもりである。

Our antifungal and antifungal bacteria are highly sensitive to bacteria, and the anti-cancer tolerance mechanism is highly sensitive to cancer tolerance, and the special drug delivery system is capable of excreting bacteria. Calcium excretion, Ca ^ & lt;2+> antagonism, closeness of P-glycoprotein, closeness of P-glycoprotein, antimicrobial activity. More efficient and active excretion of ATP in the cells is very good in terms of the ability to excrete the intracellular DNA of the active enzymes. ATP add water to decompose the water and use it to discharge the line. The anti-cancer protein is excreted and the protein is excreted. The first strain, wild strain and tolerant strain were cultured in large numbers, and the membrane proteins were isolated. SDS electrophoresis assay showed that there was a positive effect on the membrane proteins of the resistant strains and the 90KDa was close to the specific amount of the tolerant strain. Anti-P-glycoprotein antibody, anti-P-glycoprotein antibody and anti-P-glycoprotein antibody (JSB-1). The results of the experiment, the knowledge of the JSB-1 users for the special 90KDa session. The anti-P-glycoprotein antibody (JSB-1) was detected by using the anti-P-glycoprotein antibody (PGP). The results of the experiment, the knowledge of the JSB-1 users for the special 90KDa session. The molecular weight of P-glycoprotein excreted by bacteria is better than that of P-glycoprotein. The P-glycoprotein, the left and right sides, and the half-split discharge machine are capable of causing severe pain and having a deep smell. ,. JSB-1 genes recognize that anti-cancer excretion proteins and P-glycoproteins are closely related to the production of anti-cancer proteins and good bacteria. Please tell me that the investigation of P-glycoprotein and P-glycoprotein has been sent to you. Now, the membrane is used to separate the soluble solution, the antibody is combined with the index, and the precision is used. In the coming year, we will focus on the study of P-glycoproteins in the field of molecular biology in the field of physical chemistry, physical chemistry and molecular biology. The results showed that the anti-cancer drug was excreted by the anti-cancer agent.

项目成果

M.Komatsubara et al.: "Characterization of cloxorubicin-efflux pump in archaebacteria:This pump recognizes many structurally unrelated compounds and is energiqed by ATP." Biochim. Biophys. Acta. (in press).

M.Komatsubara 等人：“古细菌中氯霉素外排泵的特征：该泵可识别许多结构上不相关的化合物，并由 ATP 提供能量。”