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ヒト細胞のDNA代謝に関与するヘリカーゼの探索と構造解析

参与人体细胞DNA代谢的解旋酶的搜索和结构分析

基本信息

批准号：
07772205
负责人：
浴俊彦
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772205/
关键词：
ヘリカーゼファミリー DNA代謝 RNA代謝ホモロジーサーチ酵母 cDNA ホモログ

项目摘要

(1)系統的なヒトヘリカーゼファミリー遺伝子を単離するために、ヘリカーゼファミリーに共通したモチーフ配列(DEAD等 motif I-VI)に対するPCR primerをデザインして、HeLa細胞より作製されたcDNAライブラリーからPCRによって候補遺伝子断片を増幅・回収することを試みた。単離されたcDNA断片をクローンし、一部につき塩基配列解析を行った。しかし、ライブラリー中のcDNA種の偏りを反映し、elongation factorなどabundantなcDNAクローン断片が数多く得られ、稀少なcDNA種を見出すことは困難であった。(2)そこでヘリカーゼファミリーの単離について、(1)とは別のアプローチを取ることに決めた。即ち、現在、その全塩基配列が決定されつつある酵母遺伝子からヘリカーゼファミリーに保存されたモチーフを持った遺伝子を同定し、これらの遺伝子の遺伝子破壊、蛋白質発現によるヘリカーゼ活性の検討、および相同性検索によるヒトホモログの同定を通じて、新たなヘリカーゼファミリー遺伝子を単離することを試みている。既に酵母で変異株などとして同定されたものを除く新規遺伝子8個を選び、遺伝子破壊を行った結果、少なくとも5個の増殖に必須なヘリカーゼファミリー遺伝子を見出している。現在、その生理的機能・酵素活性などについて検討している。(3)生化学的に同定されたヘリカーゼについてそれらの一次構造(モチーフ)情報を得るため、東大・薬学部(榎本助教授)と共同で、マウスDNAヘリカーゼBについてその一次構造解析を行った。しかし、ヒトDNAヘリカーゼBについては複数のcDNAライブラリーやRT-PCRなどによるスクリーニングでは単離することができなかった。

(1)The PCR primer for HeLa cell production was tested by cDNA sequencing, PCR amplification, and amplification of candidate gene fragments. A fragment of cDNA was isolated and a part of cDNA was sequenced. The number of cDNA fragments in the genome is large and the number of cDNA fragments in the genome is rare. (2)The first step is to make a decision. That is, all base sequences are determined by the identification of yeast genes, the identification of yeast genes, the identification of protein genes, and the identification of new yeast genes. In addition, the yeast has different strains, different strains. Now, the physiological function of the enzyme activity, the enzyme activity, etc. (3)Biochemistry is the same as DNA. It is the same as DNA. It is the same as DNA. The DNA sequence of the DNA sequence was amplified by RT-PCR and the DNA sequence was amplified by PCR.