真核細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの探索

寻找参与真核细胞 DNA 复制的 DNA 解旋酶

• 批准号: 06772176
• 负责人: 浴 俊彦
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772176/
• 关键词: DNA複製; DNAヘリカーゼ; DNAプライマーゼ; DNAポリメラーゼalpha; cDNA

(1)DNAポリメラーゼalpha固相化カラムによる複製に関与するDNAヘリカーゼの同定について:ヒトDNAポリメラーゼと強固な複合体を形成し、DNA複製開始に必要なDNAプライマーゼと物理的に相互作用するヘリカーゼの検出を目指している。まずヒトDNAプライマーゼをコードする46,56kDa両サブユニットcDNAをヒトKB細胞cDNAライブラリーより単離・構造解析を行った。さらに固相化カラムの調製に必要な両蛋白質の過剰発現を目的として、大腸菌を宿主とする組み換えDNAの蛋白質発現を試みたが上手くいかなかった。現在、バキュロウイルス系による蛋白質発現を試みている。(2)DNAヘリカーゼファミリーの単離の試みについて:ヘリカーゼモチーフを持つ遺伝子(cDNA)の単離をめざして、2通りのPCRプライマー(モチーフIa<‐‐>II<‐‐>V)を設計して低いアニール温度(37度)にてcDNAライブラリーを鋳型にPCRを行った結果、1つのプライマー(II【tautomer】V)で約550bp付近に単一のバンドが検出できた。このバンドを単離してプロープとし、ヒトKB細胞cDNAライブラリーを現在スクリーニングしている。またPCRを用いるためにcDNA中の存在比に影響されるため、均衡化されたライブラリーの使用を検討している。(3)生化学的に同定されたヘリカーゼについてそれらの一次構造(モチーフ)情報を得るため、東大・薬学部(榎本助教授)と共同研究を行い、ヒトDNAヘリカーゼQ1についてはその染色体座位(12p12)を決定し、またヘリカーゼBについてマウスcDNAクローンの単離とその一次構造解析を行っている。

(1)DNA sequencing and alpha immobilization are essential for DNA sequencing and replication. DNA sequencing and synchronization are essential for DNA sequencing and DNA replication initiation. The 46,56kDa cDNA fragment was isolated from the DNA fragment. In addition, the protein production of E. coli and its host cells was studied. Now, it's time for protein production. (2)DNA sequence analysis: DNA sequence analysis: DNA sequence analysis This is the first time that a cell DNA fragment has been identified. The use of PCR in the presence of a ratio of cDNA, equalization and the use of the model (3)The identification of DNA from Q1 to Q2 in biochemistry is the key to the determination of DNA from Q1 to Q2 and the analysis of DNA from Q1 to Q2 in biochemistry.

项目成果

Seki,M.et al.: "Molecular cloning of cDNA encoding human DNA helicase Q1 which has homology to Escherichia coli RecQ helicase and localization of the gene at chromosome 12p12" Nucleic Acids Res.22. 4566-4573 (1994)

Seki,M.等人：“编码人类 DNA 解旋酶 Q1 的 cDNA 的分子克隆，该解旋酶与大肠杆菌 RecQ 解旋酶具有同源性，并且将该基因定位在染色体 12p12 上”Nucleic Acids Res.22。

Eki,T.: "Poly(ADP-ribose)polymerase inhibits the DNA replication by human replicative DNA polymerase α,δ,and ε in bitro" FEBS Letter. 356. 261-266 (1994)

Eki, T.：“聚（ADP-核糖）聚合酶抑制人复制 DNA 聚合酶 α、δ 和 ε 的 DNA 复制”FEBS Letter，356. 261-266 (1994)。

Seki, M. et al.: "Characterization of DNA synthesis and DNA-dependent ATPase activity at the restrictive temperature in temperature-sensitive mutants, tsFT848 cells, with thermolabile DNA helicase B" Mol. Cell. Biol.15. 165-172 (1995)

Seki, M. 等人：“使用不耐热 DNA 解旋酶 B 在温度敏感突变体 tsFT848 细胞的限制温度下表征 DNA 合成和 DNA 依赖性 ATP 酶活性”Mol。